Постановление № 1006 от 17.10.2018

ПРАВИТЕЛЬСТВО РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА

ПОСТАНОВЛЕНИЕ

об утверждении методов отбора проб и методов анализа для контроля

уровней диоксинов, диоксиноподобных ПХБ и недиоксиноподобных

ПХБ в определенных пищевых продуктах

№ 1006  от  17.10.2018

 (в силу 09.11.2019) 

Мониторул Офичиал ал Р. Молдова № 416-422 ст. 1116 от 09.11.2018

* * *

На основании части (5) статьи 14 Закона № 306/2018 о безопасности пищевых продуктов (Официальный монитор Республики Молдова, 2019 г., № 59-65 ст.120), с последующими изменениями и части (1) статьи 24 Закона № 221/2007 о ветеринарно-санитарной деятельности (повторное опубликование: Официальный монитор Республики Молдова, 2013 г., № 125-129, ст.396) Правительство

[Формула принятия изменена Пост.Прав. N 13 от 27.01.2021, в силу 19.03.2021]

ПОСТАНОВЛЯЕТ:

1. Утвердить методы отбора проб и методы анализа для контроля уровней диоксинов, диоксиноподобных ПХБ и недиоксиноподобных ПХБ в определенных пищевых продуктах (прилагается).

2. Контроль за исполнением настоящего Постановления возложить на Национальное агентство по безопасности пищевых продуктов.

3. Настоящее постановление вступает в силу по истечении 12 месяцев с даты опубликования.

Утверждены

Постановлением Правительства

№ 1006/2018

МЕТОДЫ

отбора проб и методы анализа для контроля уровней диоксинов,

диоксиноподобных ПХБ и недиоксиноподобных ПХБ

в определенных пищевых продуктах

Методы отбора проб и методы анализа для контроля уровней диоксинов, диоксиноподобных ПХБ и недиоксиноподобных ПХБ в определенных пищевых продуктах (в дальнейшем – Методы) являются переложением положений Регламента (ЕС) 2017/644 комиссии от 5 апреля 2017 г. об определении методов отбора проб и методов анализа для контроля уровней диоксинов, диоксиноподобных ПХБ и недиоксиноподобных ПХБ в определенных пищевых продуктах, опубликованного в Официальном журнале Европейского Союза, серия L № 92 от 6 апреля 2017 г., стр. 9-34, и об отмене Регламента (ЕС) № 589/2014, опубликованного в Официальном журнале Европейского Союза, серия L № 54 от 26 февраля 2009 г., стр. 1.

Глава 1

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1. Методы отбора проб и методы анализа для контроля уровней диоксинов, диоксиноподобных полихлорированных бифенилов (в дальнейшем – ПХБ) и ПХБ 28, ПХБ 52, ПХБ 101, ПХБ 138, ПХБ 153 и ПХБ 180 (в дальнейшем – недиоксиноподобные ПХБ) в некоторых пищевых продуктах устанавливают требования к отбору проб и требования к анализу для контроля уровней диоксинов, диоксиноподобных ПХБ и недиоксиноподобных ПХБ в определенных пищевых продуктах.

2. В настоящих Методах применяются определения, указанные в Постановлении Правительства № 265/2009 об утверждении Регламента применения методов испытаний и интерпретации результатов в области ветеринарной санитарии.

Дополнительно применяются следующие определения:

Аналит – вещество, которое должно быть обнаружено, идентифицировано и/или определено количественно, и производные, которые образуются во время анализа;

уровень действия – уровень определенного вещества, инициирующий расследование, чтобы определить источник данного вещества, в случаях обнаружения повышенных уровней применения вещества;

методы скрининга – методы, используемые для отбора этих проб с уровнями полихлорированных дибензо-п-диоксинов (в дальнейшем – ПХДД)/фуранов и диоксиноподобных ПХБ, которые превышают максимальные уровни или уровни действия. Эти методы обладают высокой способностью обработки образцов, эффективной с точки зрения затрат, повышая тем самым шанс обнаружить новые случаи, в которых большая степень подверженности может привести к рискам для здоровья потребителей. Методы скрининга основаны на биоаналитических методах или газовой хроматографии, хроматографии в газовой фазе вещества (в дальнейшем – ГХ)-МС. Результаты проб, которые превышают пороговое значение, установленное для проверки соответствия максимальному уровню, должны быть проверены новым полным анализом исходного образца с использованием подтверждающего метода;

подтверждающие методы – методы, которые предоставляют полную или дополнительную информацию для обеспечения четкой идентификации и количественной оценки ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ на максимальном уровне, или, в случае необходимости, на уровне действия. Такие методы используют газовую хроматографиию в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения (в дальнейшем – ГХ-МСВР) или газовую хроматографию в сочетании с масс-спектрометрией (в дальнейшем – ГХ-МС/МС);

биоаналитические методы – методы, основанные на использовании биологических принципов, таких как клеточный анализ, анализ свойств рецепторов или иммуноанализ. Они не дают результаты на уровне конгенера, а только указывают уровень токсического эквивалента (в дальнейшем – TEQ), выраженный в биоаналитических эквивалентах (в дальнейшем – BEQ), чтобы подтвердить тот факт, что не все соединения, присутствующие в экстракте образца, которые дают ответ в тесте, могут удовлетворять всем требованиям TEQ-принципа;

видимое восстановление биологического теста – значение уровня BEQ, рассчитанное по калибровочной кривой 2,3,7,8-тетрахлородибензо-п-диоксина (в дальнейшем – ТХДД ) или ПХБ 126 с поправкой на холостую пробу, а затем деленное на уровень TEQ, определяемый методом подтверждения. Оно нацелено на коррекцию таких факторов, как потеря соединений ПХДД/Ф и диоксиноподобных соединений на этапах экстрагирования и очистки, коэкстрактивные соединения, которые приводят к усилению или ослаблению ответа (агонистические и антагонистические эффекты), качество приведения кривой или различия между значениями коэффициента токсической эквивалентности (в дальнейшем – TEF) и относительного потенциала (в дальнейшем – REP). Видимое восстановление биологического теста рассчитывается исходя из подходящих эталонных образцов с характерными образцами конгенера вблизи максимального уровня или уровня действия;

дубликатный анализ – отдельный анализ интересующих аналитов с использованием второй части аликвоты того же гомогенизированного образца;

конкретный принятый предел количественной оценки отдельного конгенера в образце – минимальная концентрация аналита, которая может быть измерена и соответствует критериям идентификации;

предел количественной оценки отдельного конгенера может быть определен как:

a) концентрация аналита в экстракте образца, который производит инструментальный отклик на двух разных ионах, подлежащих мониторингу с отношением С/Ш (сигнал/шум) 3:1 для менее интенсивного сигнала;

или, если по техническим причинам расчет соотношения С/Ш не дает надежных результатов;

b) точка, соответствующая самой низкой концентрации на калибровочной кривой, которая дает приемлемое (≤ 30%) и последовательное (измеренное, по меньшей мере, в начале и в конце аналитической серии образцов) отклонение от среднего относительного коэффициента отклика, рассчитанного для всех точек на калибровочной кривой в каждой серии образцов;

верхняя граница – концепт, который требует использования предела количественного определения вклада каждого, не подвергавшегося количественному определению конгенера;

нижняя граница – концепт, который требует использования нуля для вклада каждого, не подвергавшегося количественному определению конгенера;

средняя граница – концепт, который требует использования половины предела количественного определения, подсчитывая вклад каждого, не подвергавшегося количественному определению конгенера;

партия – идентифицируемое количество пищевых продуктов, поставляемых одновременно и по определению должностного лица, имеющих общие характеристики, такие как происхождение, ассортимент, тип упаковки, упаковщик, поставщик или отметки. В случае рыбы и рыбной продукции размер рыбы также должен быть сопоставим. В случае если размер и/или вес рыбы не подлежит сопоставлению в рамках одной поставки, поставка может все еще считаться крупной партией, но необходимо применить специальную процедуру отбора проб;

часть партии – обозначенная часть крупной партии для проведения метода отбора образцов в этой обозначенной части. Каждая часть партии должна быть физически отделена и идентифицируема;

накопительная проба – количество материала, отбираемого в одном месте от партии или части партии;

совокупная проба – общее количество накопительных проб, отбираемых от партии или части партии;

лабораторная проба – репрезентативная часть/количество совокупных проб, предназначенных для лаборатории.

Глава II

МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ ДЛЯ ОФИЦИАЛЬНОГО КОНТРОЛЯ УРОВНЕЙ ДИОКСИНОВ 

(ПХДД/ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ ДИБЕНЗОФУРАНОВ), ДИОКСИНОПОДОБНЫХ ПХД

И НЕДИОКСИНОПОДОБНЫХ ПХД В НЕКОТОРЫХ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

Раздел 1

Требования к отбору проб

3. Образцы, предназначенные для официального контроля уровней диоксинов (ПХДД/Ф), диоксиноподобных ПХБ и недиоксиноподобных ПХБ в пищевых продуктах, должны приниматься в соответствии с методами, описанными в настоящей главе. Совокупные пробы, полученные таким образом, считаются репрезентативными для партии или части партии, от которых они были отобраны.

4. На основе уровней, определенных в лабораторных образцах, устанавливается, если были соблюдены максимальные уровни, предусмотренные в приложении к Положению об утверждении Санитарного регламента о загрязнителях в пищевых продуктах, утвержденному Постановлением Правительства № 520/2010.

5. Для обеспечения соблюдения положений частей (2)-(6) статьи 3 Закона № 296/2017 об общих требованиях гигиены пищевых продуктов оператор пищевой промышленности при отборе проб для контроля уровня диоксинов (ПХДД/Ф), диоксиноподобных ПХБ и недиоксиноподобных ПХБ должен применять методы, описанные в разделе 2, или эквивалентную процедуру отбора проб, которая демонстрирует тот же уровень представления, что и процедура отбора проб, описанная в разделе 2.

6. Отбор проб в рамках официального контроля осуществляется уполномоченным лицом, назначенным Национальным агентством по безопасности пищевых продуктов. Отбор проб в ходе проверок, проводимых оператором пищевой промышленности, осуществляется обученным человеком.

7. Пробы отбираются отдельно от каждой партии или части партии, подлежащей исследованию.

8. В ходе отбора и приготовления проб необходимо соблюдать меры предосторожности во избежание любых изменений, которые могут оказать негативное влияние на содержание диоксинов и ПХБ, негативно влияющих на аналитическое определение или сделать совокупные пробы нерепрезентативными.

9. Накопительные пробы необходимо брать в разных местах одной партии или части партии. Отклонение от данной процедуры должно регистрироваться в протоколе, предусмотренном в пункте 13.

10. Совокупная проба составляется из накопительных проб и должна весить минимум 1 кг, за исключением случаев, когда это не представляется целесообразным, например, если были взяты пробы из одной упаковки или когда продукт имеет очень высокую коммерческую ценность.

11. Дубликатные пробы, используемые для контроля, оспаривания и арбитража, отбираются из гомогенизированной совокупной пробы. Объем лабораторных образцов, подлежащих проверке, должен быть достаточным, по меньшей мере, для проведения дубликатного анализа.

12. Каждая проба помещается в чистый, изготовленный из инертного материала контейнер, обеспечивающий надлежащую защиту от контаминации, потери аналитов вследствие абсорбции внутренними стенками контейнера и ущерба при перевозке. Принимаются все необходимые меры предосторожности во избежание любых изменений в составе пробы, которые могут возникнуть при транспортировке или хранении.

13. Каждая проба, отобранная для официального использования, опечатывается в месте отбора проб и маркируется. Для каждого отбора проб составляется протокол, который позволяет однозначно идентифицировать каждую партию и должен содержать дату и место отбора проб наряду с дополнительной информацией, которая может помочь аналитику.

Раздел 2

План отбора проб

14. Применяемый метод отбора проб должен обеспечивать репрезентативность совокупной пробы для партии (части партии), подвергаемой контролю. Крупные партии необходимо делить на части при условии, что часть партии может быть физически отделена. В отношении продуктов, продаваемых крупными бестарными партиями (например, растительные масла), применяются значения, предусмотренные в таблице 1. Для других продуктов применяются значения, указанные в таблице 2. Принимая во внимание, что вес партии не всегда является строго кратным весу частям партии, вес части партии может превышать упомянутый вес максимум на 20%.

15. Минимальное количество накопительных проб, подлежащих отбору из партии или части партии, указана в таблицах 3 и 4.

16. Перед отбором проб партию или часть партии бестарных жидких продуктов следует тщательно перемешать механическими или ручными способами в целях равномерного распределения контаминантов. Для формирования совокупной пробы достаточно отобрать три образца от партии или части партии.

17. Накопительные пробы должны иметь схожий вес. Вес накопительной пробы должен составлять минимум 100 граммов.

18. Любое отклонение от этого требования регистрируется в протоколе, предусмотренном в пункте 13. Объем совокупной пробы для куриных яиц должен составлять минимум 12 яиц (для бестарных партий, а также для партий, состоящих из индивидуальных упаковок, применяются значения, указанные в таблицах 3 и 4).

19. Если партия или часть партии состоит из индивидуальных упаковок или единиц, количество упаковок или единиц, которое следует отобрать для формирования совокупной пробы, приведено в таблице 4.

20. Считается, что рыбы сопоставимы по размеру и весу, когда разница в размере и весе не превышает около 50 %. Количество накопительных проб, подлежащих отбору от партии, указано в таблице 3. Совокупная проба, объединяющая все накопительные пробы, должна весить минимум 1 кг. При отборе проб от партий рыбы, состоящих из целых тушек рыб сопоставимых размеров и веса, применяются следующие требования:

1) если партия, которая подлежит отбору, содержит мелкие тушки рыбы (каждая весом менее 1 кг), целая тушка рыбы отбирается в качестве накопительной пробы для формирования совокупной пробы. Если в результате совокупная проба весит более 3 кг, накопительные пробы могут состоять из средней части тушки рыбы, каждая весом минимум 100 граммов, для формирования совокупной пробы. Цельная часть, в отношении которой применим максимальный уровень, используется для гомогенизации пробы. Средняя часть тушки рыбы является той частью, где находится ее центр тяжести. В большинстве случаев он располагается на уровне спинного плавника (если рыба имеет спинной плавник) либо посередине между жаберной щелью и анальным отверстием;

2) если партия, которая подлежит отбору, содержит более крупные тушки рыбы (каждая весом более 1 кг), накопительная проба должна состоять из средней части тушки рыбы. Каждая накопительная проба должна весить минимум 100 граммов. В отношении рыб среднего размера (от 1 до 6 кг) накопительная проба отбирается как срез тушки от хребта до брюха в средней части тушки рыбы. В отношении очень крупных тушек рыб (например, больше 6 кг) накопительная проба отбирается в правой (вид спереди) дорсолатеральной области мышечной ткани в средней части тушки рыбы. Если такой кусок отбирается в средней части тушки рыбы, то это приведет к значительному экономическому ущербу, взятие трех накопительных проб весом минимум 350 граммов каждая можно считать достаточным независимо от размера партии, или в ином случае можно отбирать равную этому размеру часть мышечной ткани ближе к хвостовой части и мышечной ткани ближе к голове тушки одной рыбы для формирования накопительной пробы, репрезентативной для проверки уровня диоксинов в целой тушке рыбы.

21. При отборе проб от партий рыбы, состоящих из целых тушек рыб разного размера и/или веса, применяются следующие требования:

1) в отношении составления пробы применяются положения пункта 20;

2) когда в партии существует преобладающий класс/категория по весу или размеру (около 80% или более от партии), следует отбирать пробы от тушек рыб с доминирующим размером или весом. Эта проба считается репрезентативной для целой партии;

3) когда в партии нет преобладающего класса/категории по весу или размеру, необходимо обеспечить, чтобы отобранная для взятия проб рыба была репрезентативной по этой партии.

22. Отбор проб пищевых продуктов на этапе розничной торговли осуществляется в соответствии с положениями по отбору проб, установленными в пункте 7. Когда это невозможно, можно применять альтернативный метод отбора проб на этапе розничной торговли, при условии, что он обеспечивает достаточную репрезентативность для партии или части партии, из которой отбираются пробы.

Раздел 3

Соответствие партии спецификациям

23. Для недиоксиноподобных ПХБ партия считается соответствующей, если аналитический результат для суммы недиоксиноподобных ПХБ не превышает соответствующего предельного уровня, как это предусмотрено в Постановлении Правительства № 520/2010 об утверждении Санитарного регламента о загрязнителях в пищевых продуктах. Партия считается не соответствующей в случае, если среднее значение двух верхних границ аналитических результатов, полученных в результате дубликатным анализом, превышает максимальный уровень с учетом расширенной неопределенности в измерениях (в дальнейшем – U). U рассчитывается с использованием коэффициента охвата 2, который дает уровень достоверности 95%. Партия считается не соответствующей, если среднее измеренных значений за вычетом расширенной неопределенности среднего значения превышает установленный максимальный уровень. Правила, упомянутые в этом пункте, применяются для аналитических результатов, полученных по данной пробе для официального контроля.

24. Для диоксинов (ПХДД/Ф) и диоксиноподобных ПХБ партия считается соответствующей, если результат одного анализа:

1) выполненного методом скрининга с долей ложно соответствующих результатов ниже 5%, указывает на то, что уровень не превышает соответствующий максимальный уровень ПХДД/Ф и сумму ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ, как указано в Постановлении Правительства № 520/2010 об утверждении Санитарного регламента о загрязнителях в пищевых продуктах;

2) выполненного подтверждающим методом, не превышает соответствующий максимальный уровень ПХДД/Ф и сумму ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ, как указано в Постановлении Правительства № 520/2010 об утверждении Санитарного регламента о загрязнителях в пищевых продуктах.

Для метода скрининга должно быть установлено предельное значение для принятия решения о соблюдении соответствующих максимальных уровней, установленных как для ПХДД/Ф, так и для суммы ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ.

Партия считается не соответствующей максимальному уровню, установленному Постановлением Правительства № 520/2010 об утверждении Санитарного регламента о загрязнителях в пищевых продуктах, в случае если среднее значение двух верхних границ аналитических результатов (дубликатный анализ), полученных с использованием подтверждающего метода, превышает максимальный уровень с учетом расширенной неопределенности в измерениях.

Расширенная неопределенность в измерениях рассчитывается с использованием коэффициента охвата 2, который дает уровень достоверности 95%. Партия считается несоответствующей, если среднее измеренных значений за вычетом расширенной неопределенности среднего значения превышает установленный максимальный уровень.

Сумму предполагаемых расширенных неопределенностей отдельных аналитических результатов для ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ следует использовать для предполагаемой расширенной неопределенности суммы ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ.

Нормы, указанные в настоящем пункте, применяются для аналитического результата, полученного по данной пробе для официального контроля.

25. Уровни действия служат в качестве инструмента для выбора проб в случаях, когда необходимо определить источник загрязнения и принять меры по его сокращению или устранению. Методы скрининга задают соответствующие предельные значения для выбора этих образцов. Когда необходимы значительные усилия для установления источника и сокращения или устранения загрязнения, может быть показано, что превышение уровня действия будет подтверждаться путем дубликатного анализа с использованием подтверждающего метода и с учетом расширенной неопределенности в измерениях.

Глава III

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРОБ И ТРЕБОВАНИЯ К МЕТОДАМ АНАЛИЗА,

ИСПОЛЬЗУЕМЫМ ПРИ КОНТРОЛЕ УРОВНЕЙ ДИОКСИНОВ

(ПХДД/Ф)  И  ДИОКСИНОПОДОБНЫХ  ПХБ  В

ОПРЕДЕЛЕННЫХ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

Раздел 1

Методы анализа

26. Требования, установленные в настоящей главе, применяются, когда продукты питания анализируются в рамках официального контроля уровней 2,3,7,8-замещенных полихлорированных дибензо-п-диоксинов и полихлорированных дибензофуранов (ПХДД/Ф) и ПХБ, а также в подготовке проб и проведении лабораторных испытаний для обеспечения соблюдения положений Закона № 296/2017 об общих требованиях гигиены пищевых продуктов.

27. Мониторинг наличия ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ в пищевых продуктах может проводиться с использованием двух различных типов аналитических методов:

1) методы скрининга

a) целью методов скрининга является отбор тех образцов, в которых уровни ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ превышают максимальные уровни или уровни действия. Эти методы скрининга обладают высокой способностью обработки образцов, эффективной с точки зрения затрат, повышая тем самым шанс обнаружить новые случаи, в которых большая степень подверженности может привести к рискам для здоровья потребителей. Их применение должно быть направлено на предотвращение ложно соответствующих результатов. Они могут включать биоаналитические и ГХ-МС методы;

b) методы скрининга сравнивают аналитический результат с пороговой величиной, предоставляя решение типа да/нет относительно возможного превышения максимума или уровня действия. Концентрация ПХДД/Ф и сумма ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ в образцах, которые предположительно не соответствуют максимальному уровню, должны быть определены или подтверждены подтверждающим методом;

c) кроме того, методы скрининга могут указывать на уровни ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ, присутствующих в образце. В случае применения биоаналитических методов скрининга результат выражается как биоаналитические эквиваленты (BEQ), тогда как в случае применения физико-химических методов ГХ-МС он выражается как токсические эквиваленты (TEQ). Численно выраженные результаты методов скрининга подходят для демонстрации соответствия или предполагаемого несоблюдения или превышения уровней действия и указывают на диапазон уровней концентрации в случае последующего подтверждения с помощью подтверждающих методов. Они не подходят для таких целей, как оценка уровней фона, оценка поглощения, следование временным тенденциям в уровнях концентрации или переоценка уровней действия и максимальных уровней;

2) методы подтверждения

Методы подтверждения позволяют однозначно идентифицировать и количественно оценить ПХДД/Ф и диоксиноподобные ПХБ, присутствующие в образце, и предоставить полную информацию для каждого конгенера. Следовательно, эти методы позволяют контролировать максимальные уровни и уровни действия, включая подтверждение результатов, полученных методами скрининга. Кроме того, результаты могут использоваться для других целей, таких как определение низких уровней фона в мониторинге продуктов питания, следование временным тенденциям, оценка подверженности населения и создание базы данных для возможной переоценки уровней действия и максимальных уровней. Они также важны для создания шаблонов конгенеров в целях определения источника возможного загрязнения. Такие методы используют ГХ-МСВР. Для подтверждения соответствия или несоответствия максимальному уровню может использоваться ГХ-МС/МС.

28. Для расчета концентраций TEQ концентрации отдельных веществ в данном образце умножаются на их соответствующие TEF, как установлено в таблице 5, и затем суммируются для получения общей концентрации диоксина подобных соединений, выраженных в виде TEQ.

29. Методы скрининга и подтверждения могут применяться для контроля определенного массива только в том случае, если методы достаточно чувствительны, чтобы надежно определять уровни в зоне уровня действия или максимального уровня.

Раздел 2

Требования к обеспечению качества

и лабораторные требования

30. Следует принимать меры по предотвращению перекрестного загрязнения на каждом этапе процедуры отбора проб и анализа.

31. Пробы необходимо хранить и транспортировать в стеклянных, алюминиевых, полипропиленовых или полиэтиленовых контейнерах. Следы бумажной пыли следует удалить из контейнера для проб.

32. Хранение и транспортировка проб осуществляются таким образом, чтобы сохранить целостность пробы пищевого продукта.

33. Насколько это возможно, каждая лабораторная проба мелко размалывается и тщательно размешивается с помощью процесса, которым достигается полная гомогенизация (например, измельчение пробы настолько, чтобы она проходила через сито с ячейками 1 мм); пробы следует высушить перед помолом, если содержание влаги слишком высоко.

34. Производится контроль реагентов, стеклянной посуды и оборудования в целях выявления возможного влияния результатов, основанных на TEQ или BEQ.

35. Производится холостой анализ, осуществляя полную аналитическую процедуру только без пробы.

36. Для биоаналитических методов вся стеклянная посуда и растворители, используемые в анализе, следует проверить на отсутствие соединений, которые мешают обнаружению целевых соединений в рабочем диапазоне. Стеклянная посуда должна быть промыта растворителями или/и нагрета при температурах, подходящих для удаления с ее поверхности следов ПХДД/Ф, диоксиноподобных соединений и мешающих соединений.

37. Объем выборки, используемой для экстрагирования, должен быть достаточным для выполнения требований относительно достаточно низкого рабочего диапазона, включая концентрации на максимальных уровнях или уровнях действия.

38. Специальные процедуры приготовления проб, используемые для исследуемых продуктов, должны соответствовать направлениям, признанными на международном уровне.

39. В случае с рыбой кожу необходимо удалить, так как максимальный уровень применим к мышечному мясу без кожи. Однако необходимо, чтобы все остатки мяса и жировой ткани на внутренней части кожи были тщательно и целиком отделены от кожи и добавлены в пробу для исследования.

40. Анализ образцов для определения уровней диоксинов, диоксиноподобных ПХБ и неоксоксиноподобных ПХБ в некоторых пищевых продуктах должен проводиться в аккредитованной лаборатории в соответствии с национальным стандартом SM SR EN ISO/IEC 17025:2018 "Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий".

Раздел 3

Основные требования к аналитическим процедурам

на диоксины (ПХДД/Ф) и диоксиноподобные ПХБ

41. Для ПХДД/Ф обнаруживаемые количества должны находиться в верхнем диапазоне фемтограмм (10^–15 г) из-за крайней токсичности некоторых из этих соединений. Для большинства конгенеров ПХБ предел количественной оценки в диапазоне нанограмм (10^–9 г) уже достаточен. Однако для измерения более токсичных диоксиноподобных конгенеров ПХБ (в частности, неортозамещенных конгенеров) нижняя зона рабочего диапазона должна достигать низких уровней пикограмм (10^–12 г).

42. Необходимо разграничение ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ от множества других коэкстрагируемых и возможно интерферирующих соединений, присутствующих в концентрациях до нескольких порядков возрастания выше, чем интересующие аналиты. В отношении методов газовой хроматографии/масс-спектрометрии (ГХ-МС) необходима дифференциация различных конгенеров, таких как токсичные (например, семнадцать 2,3,7,8-замещенных ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ) и других конгенеров.

43. Биоаналитические методы способны обнаруживать целевые соединения в виде суммы ПХДД/Ф и/или диоксиноподобных ПХБ. Очистка образцов направлена на удаление соединений, вызывающих ложно несоответствующие результаты, или соединений, которые могут уменьшить ответ, вызывая ложно соответствующие результаты.

44. Для методов ГХ-МС определение обеспечивает достоверную оценку истинной концентрации в образце. Высокая точность (точность измерения: близость сходства результата измерения и достоверности или приписанного значения измеряемой величины) необходима во избежание отбраковки результата анализа образца на основе ненадлежащей надежности оценки TEQ. Точность выражается как истинность (различие между средней величиной, вычисленной для аналита в сертифицированном материале и его сертифицированной величиной, выраженной как процентное соотношение от этой величины) и прецизионность (относительное стандартное отклонение RSDR, подсчитанное по результатам, полученным в условиях воспроизводимости).

45. Для биоаналитических методов необходимо определить видимое восстановление биологического теста.

46. Валидация в диапазоне максимального уровня и общие меры контроля качества:

1) во время процедуры проверки и/или во время рутинного анализа лаборатории должны продемонстрировать эффективность метода в диапазоне максимального уровня, например, 0,5x, 1x и 2x максимального уровня с приемлемым коэффициентом вариации для повторного анализа;

2) в качестве внутренних мер контроля качества периодически должны выполняться контрольные холостые эксперименты и эксперименты с обогащенным материалом пробы или анализ эталонных образцов (предпочтительно, если возможно, с сертифицированными референтными материалами). Регистрируются и проверяются диаграммы контроля качества (в дальнейшем – КК) для контрольных холостых экспериментов, экспериментов с обогащенным материалом пробы или анализов эталонных образцов, чтобы убедиться, что аналитическая эффективность соответствует требованиям.

47. Предел количественной оценки (в дальнейшем – ПКО) для метода биоаналитического скрининга, установление ПКО не является обязательным требованием, но метод должен доказать, что он может различать значение для холостой пробы и пороговое значение. При предоставлении уровня BEQ должен быть установлен уровень отчетности для обработки образцов, показывающих ответ ниже этого уровня. Следует продемонстрировать, что уровень отчетности отличается от процедуры холостых проб, по крайней мере, в три раза, с ответом ниже рабочего диапазона. Поэтому он рассчитывается исходя из образцов, содержащих целевые соединения в концентрации около требуемого минимального уровня, а не из отношения С/Ш или холостой пробы.

48. ПКО для подтверждающего метода должен составлять примерно одну пятую от максимального уровня.

49. Для того, чтобы подтверждающие или скрининговые методы дали достоверные результаты, должны соблюдаться следующие критерии в диапазоне максимального уровня, соответственно, для значения TEQ и значения BEQ, независимо от того, определяются ли они как общий TEQ или общий BEQ (как сумма ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ) или раздельно для ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ.

50. Требования к методам анализа, используемым для скрининга:

1) как методы анализа ГХ-МС, так и биоаналитические методы могут использоваться для скрининга. В отношении методов ГХ-МС следует применять меры, изложенные в разделе 4. Для клеточных биоаналитических методов на основе клеток специальные требования изложены в разделе 5;

2) лаборатории, применяющие методы скрининга для рутинного контроля образцов, устанавливают тесное сотрудничество с лабораториями, применяющими подтверждающий метод;

3) во время рутинного анализа эффективность метода скрининга проверяется с помощью аналитического контроля качества и непрерывной проверки метода. Должна существовать непрерывная программа для контроля соответствующих результатов;

4) 20% экстрактов образцов измеряются при обычном скрининге с добавлением и без добавления ТХДД, добавленным в соответствии с максимальным уровнем или уровнем действия, чтобы проверить, возможен ли отклик, подавленный мешающими веществами, присутствующими в экстракте образца. Измеренную концентрацию обогащенного материала пробы сравнивают с суммой концентрации необогащенного экстракта и концентрации обогащенного экстракта. Если эта измеренная концентрация более чем на 25% ниже расчетной (суммарной) концентрации, это свидетельствует о возможном подавлении сигнала, и соответствующий образец подвергается подтверждающему анализу. Результаты контролируются в диаграммах контроля качества;

5) от 2 до 10% соответствующих образцов, в зависимости от матрицы образца и лабораторного опыта, подлежат подтверждающему анализу;

6) определяется доля ложно соответствующих результатов при скрининге образцов ниже и выше максимального уровня или уровня действия. Фактические доли ложно соответствующих результатов должны быть ниже 5%. После получения как минимум 20 подтвержденных результатов на матрицу/матричную группу при контроле качества соответствующих образцов, из этой базы данных должны быть сделаны выводы о доле ложно соответствующих результатов. Результаты образцов, проанализированных в кольцевых испытаниях или во время инцидентов загрязнения, которые охватывают диапазон концентраций вплоть до, например, 2х максимального уровня (МУ), также могут быть включены в минимум 20 результатов для оценки доли ложно соответствующих результатов. Образцы охватывают наиболее частые шаблоны конгенера, представляющие различные источники. Хотя скрининговые анализы предпочтительно направлены на обнаружение проб, превышающих уровень действия, критерием для определения доли ложно соответствующих результатов является максимальный уровень с учетом расширенной неопределенности в измерениях подтверждающего метода;

7) потенциальные несоответствующие результаты скрининга всегда должны проверяться путем полного повторного анализа исходного образца с помощью подтверждающего метода. Эти образцы также могут использоваться для оценки доли ложно несоответствующих результатов. Для методов скрининга доля ложно несоответствующих результатов – это доля подтвержденных результатов, соответствующих подтверждающему анализу, когда в предыдущем скрининге образец был объявлен подозреваемым в несоответствии. Однако оценка выгодности метода скрининга должна основываться на сравнении ложно несоответствующих образцов с общим количеством проверенных образцов. Эта доля должна быть достаточно низкой, чтобы использование инструмента скрининга было выгодным;

8) в условиях проверки биоаналитические методы должны служить достоверным показателем уровня TEQ, рассчитанного и выраженного как BEQ;

9) для биоаналитических методов, проводимых в условиях повторяемости, внутрилабораторное значение RSD_r обычно будет меньше, чем RSD_R (воспроизводимость).

Раздел 4

Специальные требования в отношении методов ГХ-МС, которые

должны соблюдаться в целях скрининга или подтверждения

51. Разница между уровнями верхней границы и нижней границы не должна превышать 20% для подтверждения превышения максимального уровня или, в случае необходимости, уровня действия.

52. Контроль восстановлений:

1) добавление ¹³С-меченых 2,3,7,8 хлор-замещенных внутренних ПХДД/Ф стандартов и ¹³С-меченых внутренних диоксиноподобных ПХБ стандартов должно осуществляться в самом начале аналитического метода, например, до экстрагирования с целью валидации аналитической процедуры. Следует добавить, по меньшей мере, один конгенер для каждой из тетра-октахлорированных гомологичных групп для ПХДД/Ф и минимум один конгенер для каждой из гомологичных групп для диоксиноподобных ПХБ (в противоположность минимум один конгенер для каждой выбранной массспектрометрической функции, регистрирующей выбранные ионы, используемой для мониторинга ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ). В случае подтверждающих методов должны использоваться все семнадцать ¹³С-меченых 2,3,7,8 хлорзамещенных внутренних ПХДД/Ф стандартов и все двенадцать ¹³С-меченых внутренних диоксиноподобных ПХБ стандартов;

2) коэффициенты чувствительности детектора определяются для тех конгенеров, для которых не добавляется ¹³С-меченый аналог с помощью соответствующих калибровочных растворов;

3) для пищевых продуктов растительного происхождения и пищевых продуктов животного происхождения, содержащих менее 10% жира, добавление внутренних стандартов обязательно до экстрагирования. Для пищевых продуктов животного происхождения, содержащих более 10% жира, внутренние стандарты можно добавлять либо до экстрагирования, либо после экстрагирования жира. Соответствующую валидацию эффективности экстрагирования необходимо проводить в зависимости от стадии, на которой вводятся внутренние стандарты, и в зависимости от способа представление результатов (по продукту или жировой основе);

4) до проведения ГХ-МС анализа, необходимо добавить один или два восстанавливающих (суррогатных) стандарта;

5) для подтверждающих анализов восстановление отдельных внутренних стандартов должно находиться в диапазоне 60–120%. Более низкие или высокие уровни восстановления для отдельных конгенеров, в частности для некоторых гепта- и октахлорированных дибензодиоксинов и дибензофуранов, приемлемы на условии, что вклад в TEQ показатель не превышает 10% от общего показателя TEQ (основываясь на сумме ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ). Для методов скрининга ГХ-МС восстановление должно составлять от 30 до 140 %.

53. Удаление мешающих веществ осуществляется следующим образом:

1) отделение ПХДД/Ф от интерферирующих хлорированных соединений, таких как недиоксиноподобные ПХБ и хлорированные дифенилэфиры, осуществляется посредством соответствующих хроматографических методов (предпочтительно с колонкой с флорисилом, окисью алюминия и/или с графитовой колонкой);

2) газохроматографическое разделение изомеров должно быть на достаточном уровне (< 25% от пика до пика между 1,2,3,4,7,8-ГкХДФ и 1,2,3,6,7,8 – ГкХДФ).

54. Диапазон калибровочной кривой должен охватывать соответствующий диапазон максимального уровня или уровня действия.

55. Специальными требованиями к методам подтверждения являются:

1) для ГХ-МСВР:

а) в МСВР разрешение, как правило, будет выше или равно 10 000 для всего диапазона масс с окрестностью минимума 10%;

b) выполнение других требований в области идентификации и подтверждения как описано в стандартах, признанных на международном уровне;

2) для ГХ-МС/МС:

a) мониторинг по меньшей мере двух конкретных ионов-прекурсоров, каждый из которых имеет один определенный соответствующий ион, переходного продукта для всех меченых и немаркированных аналитов в рамках анализа;

b) максимально допустимая погрешность относительных интенсивностей ионов ± 15% для выбранных ионов переходных продуктов по сравнению с рассчитанными или измеренными значениями (в среднем по калибровочным стандартам), применяя одинаковые условия МС/МС, в частности, энергию столкновения и давление газа при столкновении, для каждого перехода аналита;

c) разрешение для каждого квадруполя должно быть установлено равным или более высоким, чем разрешение единицы массы (разрешение единицы массы: достаточное разрешение для разделения двух пиков единицы массы), чтобы свести к минимуму возможные помехи по исследуемым аналитам;

d) выполнение дополнительных критериев, определенных в стандартах, признанных на международном уровне.

Раздел 5

Специальные требования в отношении биоаналитических методов

56. Биоаналитические методы – это методы, основанные на использовании биологических принципов, таких как клеточный биоанализ, анализ свойств рецепторов или иммуноанализ.

Метод скрининга в принципе классифицирует образец как соответствующий или предположительно несоответствующий. Для этого рассчитанный уровень BEQ сравнивается с пороговым значением. Образцы ниже порогового значения объявляются соответствующими, образцы равны или превышают значение отсечки, которые, как предполагается, не соответствуют требованиям, необходимо проанализировать с помощью подтверждающего метода. На практике уровень BEQ, соответствующий двум третям максимального уровня, может служить пороговым значением при условии, что обеспечивается доля ложно соответствующих результатов ниже 5% и приемлемая доля ложно несоответствующих результатов. При отдельных максимальных уровнях для ПХДД/Ф и для суммы ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ, для проверки соответствия образцов без фракционирования требуются соответствующие пороговые значения для биологического анализа для ПХДД/Ф. Для проверки образцов, превышающих уровни действия, соответствующий процент соответствующего уровня действия будет соответствовать пороговой величине.

Если индикативный уровень выражен в BEQ, результаты выборки должны быть указаны в рабочем диапазоне и превышать предел отчетности.

57. Общими требованиями к оценке ответа на тест являются:

1) при вычислении концентраций по калибровочной кривой ТХДД значения на более высоком конце кривой будут демонстрировать высокую вариацию (высокий коэффициент вариации, в дальнейшем – CV). Рабочий диапазон – это область, в которой этот CV меньше 15%. Нижний предел рабочего диапазона (предел отчетности) должен быть дополнительно установлен значительно (по крайней мере, в три раза) выше процедур холостых проб. Верхний предел рабочего диапазона обычно представлен значением EC₇₀ (70% максимальной эффективной концентрации), но ниже, если CV превышает 15% в этом диапазоне. Рабочий диапазон должен быть установлен во время проверки. Пороговые значения должны находиться в рабочем диапазоне;

2) стандартные растворы и экстракты образцов должны испытываться трижды или, по крайней мере, дважды. При использовании дубликатов стандартный раствор или контрольный экстракт, протестированные в четырех-шести лунках, разделенных по пластине, должны давать ответ или концентрацию (возможно только в рабочем диапазоне) на основе CV <15%.

58. Калибровка бывает двух видов:

1) калибровка с помощью градуировочной кривой

a) уровни в образцах могут оцениваться путем сравнения тестового ответа с калибровочной кривой ТХДД (или ПХБ 126 или стандартной смеси ПХДД/Ф/диоксиноподобных ПХБ) для расчета уровня BEQ в экстракте, а затем в образце;

b) калибровочные кривые должны содержать от 8 до 12 концентраций (по крайней мере, в дубликатах) с достаточной концентрацией в нижней части кривой (рабочий диапазон). Особое внимание должно быть уделено качеству подгонки кривой в рабочем диапазоне. Как таковое, значение R² мало или вообще не имеет значения при оценке добротности подгонки в нелинейной регрессии. Лучшая подгонка будет достигнута путем минимизации разницы между вычисленными и наблюдаемыми уровнями в рабочем диапазоне кривой (например, путем минимизации суммы квадратов остатков);

c) оцененный уровень в экстракте образца впоследствии корректируется уровнем BEQ, рассчитанным для пробы незаполненной матрицы или раствора (для учета примесей из растворителей и используемых химических веществ) и видимым восстановлением (рассчитанным исходя из уровня BEQ подходящих референтных образцов с репрезентативными шаблонами конгенеров около максимального уровня или уровня действия). Для выполнения коррекции восстановления видимое восстановление всегда должно быть в пределах требуемого диапазона. Референтные образцы, используемые для коррекции восстановления, должны соответствовать требованиям, указанным в пункте 63;

2) калибровка с помощью референтных образцов

В качестве альтернативы может использоваться калибровочная кривая, подготовленная по меньшей мере на четырех референтных образцах: незаполненная матрица плюс три эталонных образца в 0,5х, 1,0х и 2,0х максимального уровня или уровня действия, исключая необходимость исправления холостой пробой и восстановлением, если свойства матрицы референтных образцов соответствуют свойствам неизвестных образцов. В этом случае тестовый отклик, соответствующий двум третям максимального уровня, может быть рассчитан непосредственно из этих образцов и использован как пороговое значение. Для проверки образцов, превышающих уровни действия, соответствующий процент этих уровней действия будет соответствовать пороговому значению.

59. Для отдельного определения ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ экстракты могут разделяться на фракции, содержащие ПХДД/Ф и диоксиноподобные ПХБ, что позволяет отдельно указывать уровни ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ (в BEQ). Предпочтительно использовать стандартную калибровочную кривую ПХБ 126 для оценки результатов фракции, содержащей диоксиноподобные ПХБ.

60. Видимое восстановление биологического теста рассчитывается исходя из подходящих эталонных образцов с характерными образцами конгенера вблизи максимального уровня или уровня действия и выражается в процентах от уровня BEQ по сравнению с уровнем TEQ. В зависимости от типа используемого анализа и использованных TEF, различия между коэффициентами TEF и REP для диоксиноподобных ПХБ могут приводить к низким видимым восстановлениям диоксиноподобных ПХБ по сравнению с ПХДД/Ф. Таким образом, если проводится отдельное определение ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ, то видимые восстановления биологического теста быть: для диоксиноподобных ПХБ от 20% до 60%, для ПХДД/Ф – от 50% до 130% (диапазоны применяются для калибровочной кривой ТХДД). Поскольку вклад диоксиноподобных ПХБ в сумму ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ может варьироваться между различными матрицами и образцами, видимые восстановления биологического теста для параметра суммы отражают эти диапазоны и составляют от 30 до 130%.

61. Контроль восстановлений для очистки и потеря соединений во время очистки должны проверяться при валидации. Холостая проба, заполненная смесью разных конгенеров, должна подвергаться очистке (по крайней мере, n = 3), а восстановление и изменчивость проверяются с помощью подтверждающего метода. Восстановление должно составлять от 60 до 120%, особенно для конгенеров, составляющих более 10% уровня TEQ в различных смесях.

62. При представлении отчетности по уровням BEQ предельный уровень отчетности определяется из соответствующих образцов матрицы, содержащих типичные шаблоны конгенеров, но не исходя из калибровочной кривой стандартов из-за низкой точности в нижнем диапазоне кривой. Необходимо принимать во внимание эффекты экстрагирования и очистки. Предел отчетности устанавливается значительно (по крайней мере, в три раза) выше процедур холостых проб.

63. Референтные образцы используются следующим образом:

1) референтные образцы представляют матрицу выборки, шаблоны конгенеров и диапазоны концентраций для ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ около максимального уровня или уровня действия;

2) в каждую тестовую серию включается холостая проба или, предпочтительно, незаполненная матрица и референтный образец на максимальном уровне или уровне действия. Эти образцы должны экстрагироваться и испытываться одновременно в одинаковых условиях. Референтный образец должен демонстрировать явно повышенный отклик по сравнению с холостой пробой, таким образом обеспечивая пригодность теста. Эти образцы могут использоваться для корректировок с холостыми пробами и восстановлением;

3) референтные образцы, выбранные для выполнения коррекции с восстановлением, являются репрезентативными для тестовых образцов, а это означает, что шаблоны конгенера не приводят к недооценке уровней;

4) могут включаться дополнительные референтные образцы, например, 0,5х и 2х максимального уровня или уровня действия, чтобы продемонстрировать правильную работу теста в интересующем диапазоне для контроля максимального уровня или уровня действия. В сочетании эти образцы могут использоваться для расчета уровней BEQ в тестовых образцах.

64. Для определения пороговых значений устанавливается взаимосвязь между биоаналитическими результатами в BEQ и результатами подтверждающих методов в TEQ (например, с помощью калибровочных экспериментов с матричным сопоставлением, включающих референтные образцы, увеличенные на 0, 0,5х, 1х и 2х максимального уровня (МУ), с шестью повторениями на каждом уровне, n= 24). Коэффициенты коррекции (холостая проба и восстановление) могут быть оценены исходя из этой взаимосвязи, но должны проверяться в каждой серии тестов, включая холостые пробы/незаполненные матрицы и образцы восстановления.

Пороговые значения устанавливаются для принятия решения о соответствии выборки максимальным уровням или для контроля уровней действия, в случае когда они представляют интерес, с установлением соответствующих максимальных уровней или уровней действия либо только для ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ по отдельности, либо для суммы ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ. Они представлены нижней конечной точкой распределения биоаналитических результатов (скорректированных для холостой пробы и восстановления), соответствующих пределу решения подтверждающего метода, исходя из уровня достоверности 95%, что подразумевает долю ложного соответствия <5%, а также RSD_R <25%. Пределом принятия подтверждающего метода является максимальный уровень с учетом расширенной неопределенности измерений.

На практике пороговое значение (в BEQ) может рассчитываться методами, предусмотренными на рисунке:

1) использование нижней полосы 95%-ного интервала прогнозирования на пределе решения подтверждающего метода

где:

BEQ_DL – BEQ, соответствующий пределу решения подтверждающего метода, являющегося максимальным уровнем с учетом расширенной неопределенности измерений;

S_y,x – остаточное стандартное отклонение;

t_α,f = m-2 – коэффициент Стьюдента (α = 5%, f = степень свободы, односторонний);

m – общее количество точек калибровки (индекс j);

n – количество повторений на каждом уровне,

x_i – концентрация образца (в TEQ) точки калибровки I, определяемая методом подтверждения

– среднее значение концентраций (в TEQ) всех калибровочных образцов;

i – индекс для точки калибровки i;

2) расчет исходя из биоаналитических результатов (скорректированных для холостой пробы и восстановления) нескольких анализов образцов (n ≥ 6), загрязненных на пределе решения подтверждающего метода, в качестве нижней конечной точки распределения данных при соответствующем среднем значении BEQ:

Пороговое значение = BEQ_DL – 1,64 х SD_R ,

где SDR – стандартное отклонение результатов биоанализа на BEQ_DL, измеренное в условиях лабораторной воспроизводимости;

3) расчет как среднее значение биоаналитических результатов (в BEQ, скорректированных для холостой пробы и восстановления) из множественного анализа образцов (n ≥ 6), загрязненных на двух третях максимального уровня или уровня действия. Это основано на наблюдении, что данный уровень будет в районе порога, определенного в подпунктах 1) и 2) пункта 69. Расчет пороговых значений на основе 95%-ного уровня достоверности, подразумевающего ложное соответствие <5%, и RSD_R <25%:

a) исходя из нижней полосы 95%-ного интервала прогнозирования на пределе решения подтверждающего метода;

b) исходя из множественного анализа образцов (n ≥ 6), загрязненных на пределе решения подтверждающего метода, в качестве нижней конечной точки распределения данных (представленной на рисунке колоколообразной кривой) при соответствующем среднем значении BEQ;

Рис. Расчет порогового значения (в BEQ)

4) пороговые значения на основе BEQ, рассчитанные из RSD_R, полученные во время валидации с использованием ограниченного количества выборок с различными шаблонами матрицы/конгенера, могут быть выше, чем максимальные уровни или уровни действия на основе TEQ, благодаря лучшей точности, чем достижимые в рутине, когда неизвестный спектр возможных шаблонов конгенеров должен контролироваться. В таких случаях пороговые значения должны рассчитываться из RSD_R = 25%, или две трети максимального уровня или уровня действия должны быть предпочтительными.

65. Характеристики производительности выделяются следующим образом:

1) учитывая, что никакие внутренние стандарты не могут использоваться в биоаналитических методах, испытания на повторяемость должны проводиться для получения информации о стандартном отклонении внутри и между сериями испытаний. Повторяемость должна быть ниже 20%, а внутрилабораторная воспроизводимость должна быть ниже 25%. Это должно основываться на вычисленных уровнях в BEQ после коррекции холостой пробой и восстановлением;

2) как часть процесса валидации, тест должен позволять различие между холостой пробой и уровнем порогового значения, идентификацию образцов выше соответствующего порогового значения;

3) определить целевые соединения, возможные помехи и максимально допустимые уровни холостых проб;

4) процентное стандартное отклонение в ответе или концентрации, рассчитанное по ответу (возможно только в рабочем диапазоне) трехкратного определения экстракта образца, не должно превышать 15 %;

5) нескорректированные результаты референтного образца (референтных образцов), выраженные в BEQ (холостая проба и на максимальном уровне или уровне действия), используются для оценки эффективности биоаналитического метода в течение постоянного периода времени;

6) КК для процедур холостых проб и каждого типа референтного образца регистрируются и проверяются для обеспечения соответствия аналитической эффективности требованиям, в частности, для процедур холостых проб в отношении требуемой минимальной разницы с нижним пределом рабочего диапазона и для референтных образцов в отношении внутрилабораторной воспроизводимости. Процедуры холостых проб должны быть хорошо контролируемы, чтобы избежать ложных результатов при вычитании;

7) результаты подтверждающих методов подозрительных образцов и от 2 до 10% соответствующих образцов (минимум 20 образцов на матрицу) собираются и используются для оценки эффективности метода скрининга и соотношения между BEQ и TEQ. Эта база данных может использоваться для переоценки пороговых значений, применимых к обычным образцам для проверенных матриц;

8) хорошая производительность метода также может быть продемонстрирована путем участия в кольцевых испытаниях. Результаты образцов, проанализированных в кольцевых испытаниях, охватывающие диапазон концентраций вплоть до, например, 2х максимального уровня, также могут быть включены в оценку доли ложного соотвтетствия, если лаборатория может продемонстрировать свою успешную работу. Образцы охватывают наиболее частые шаблоны конгенера, представляющие различные источники;

9) во время инцидентов пороговые значения могут переоцениваться, отражая конкретную матрицу и шаблоны конгенеров этого конкретного инцидента.

66. Методы подтверждения отчетности по результатам предполагают следующее

1) аналитические результаты содержат уровни отдельных конгенеров ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ, а значения TEQ представляются как нижняя граница, верхняя граница и средняя граница для включения максимума информации при сообщении результатов, что позволяет интерпретировать результаты в соответствии со специальными требованиями;

2) отчет включает и метод, используемый для экстрагирования ПХДД/Ф, диоксиноподобных ПХБ и липидов. Содержание липидов в образце определяется и сообщается для пищевых матриц с максимальными уровнями, выраженными на жировой основе, и с ожидаемой концентрацией жира в диапазоне 0-2%. Для других образцов определение содержания липидов является необязательным;

3) восстановление отдельных внутренних стандартов должно быть доступным в случае, если восстановления находятся за пределами диапазона, указанного в пункте 53, в случае если максимальный уровень превышен (в этом случае восстановление для одного из двух дублированных анализов), а в других случаях – по запросу;

4) поскольку расширенная неопределенность измерений должна учитываться при принятии решения относительно соответствия пробы, этот параметр также должен быть доступен. Таким образом, аналитические результаты сообщаются как х ±U, где х – аналитический результат, а U – расширенная неопределенность измерений с коэффициентом охвата 2, который дает уровень достоверности, равный приблизительно 95%. В случае отдельного определения ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ суммарное значение предполагаемой расширенной неопределенности отдельных аналитических результатов ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ следует использовать как суммарное количество ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ;

5) результаты выражаются в тех же единицах и с таким же количеством значимых цифр, что и максимальные уровни, установленные в Постановлении Правительства № 520/2010 об утверждении Санитарного регламента о загрязнителях в пищевых продуктах.

67. Биоаналитические методы скрининга в процессе отчетности включают следующее:

1) результат скрининга выражается термином "соответствующий" или "предположительно несоответствующий";

2) кроме того, можно дать ориентировочный результат для ПХДД/Ф и/или диоксиноподобных ПХБ, выраженный в BEQ, а не в TEQ. Результаты проб с ответом ниже предела отчетности должны выражаются как "ниже предела отчетности". Результаты проб с ответом выше рабочего диапазона сообщаются как "превышающие рабочий диапазон", а уровень, соответствующий верхнему краю рабочего диапазона, указывается в BEQ;

3) для каждого типа матрицы выборки в отчете указывается максимальный уровень или уровень действия, на котором основана оценка;

4) в отчете указывается тип применяемого теста, основной принцип испытания и вид калибровки;

5) отчет включает и метод, используемый для экстрагирования ПХДД/Ф, диоксиноподобных ПХБ и липидов. Содержание липидов в образце определяется и сообщается для пищевых матриц с максимальными уровнями, выраженными на жировой основе, и с ожидаемой концентрацией жира в диапазоне 0–2 % (в соответствии с существующим законодательством). Для других образцов определение содержания липидов является необязательным;

6) в случае образцов, которые предположительно не соответствуют требованиям, отчет должен содержать примечание о действии, которое необходимо предпринять. Концентрация ПХДД/Ф и сумма ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ в образцах с повышенными уровнями должна определяться/подтверждаться подтверждающим методом;

7) несоответствующие результаты представляются только из подтверждающего анализа.

68. Физико-химические методы скрининга в процессе отчетности включают следующее:

1) результат скрининга выражается термином "соответствующий" или "предположительно несоответствующий";

2) для каждого типа матрицы выборки в отчете указывается максимальный уровень или уровень действия, на котором основана оценка;

3) кроме того, могут задаваться уровни для отдельных конгенеров ПХДД/Ф и/или диоксиноподобных ПХБ и значения TEQ, сообщенных как нижняя граница, верхняя граница и средняя граница. Результаты должны быть выражены в тех же единицах и с таким же количеством значимых цифр, что и максимальные уровни, установленные в Постановлении Правительства № 520/2010 об утверждении Санитарного регламента о загрязнителях в пищевых продуктах;

4) информация по показателям восстановления отдельных внутренних стандартов должна быть доступна в случае, если восстановления находятся за пределами диапазона, указанного в пункте 57, а в других случая – по запросу;

5) в отчете указывается применяемый метод ГХ-МС;

6) отчет также должен включать метод, используемый для экстрагирования ПХДД/Ф, диоксиноподобных ПХБ и липидов. Содержание липидов в образце должно определяться и сообщаться для пищевых матриц с максимальными уровнями, выраженными на жировой основе, и с ожидаемой концентрацией жира в диапазоне 0-2 % (в соответствии с существующим законодательством). Для других образцов определение содержания липидов является необязательным;

7) в случае образцов, предположительно не соответствующих требованиям, отчет должен содержать примечание о действии, которое необходимо предпринять. Концентрация ПХДД/Ф и сумма ПХДД/Ф и диоксиноподобных ПХБ в образцах с повышенными уровнями должна быть определена/подтверждена подтверждающим методом;

8) несоответствие может быть решено только в результате подтверждающего анализа.

Глава IV

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРОБ И ТРЕБОВАНИЯ К МЕТОДАМ АНАЛИЗА,

ИСПОЛЬЗУЕМЫМ ПРИ КОНТРОЛЕ УРОВНЕЙ НЕДИОКСИНОПОДОБНЫХ

ПХБ В ОПРЕДЕЛЕННЫХ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

69. Требования, установленные настоящей главой, применяются, когда продукты питания анализируются для официального контроля уровней недиоксиноподобных ПХБ, в отношении подготовки образцов и аналитических требований к проведению проверок для обеспечения соблюдения положений частей (2)-(6) статьи 3 Закона № 296/2017 об общих требованиях гигиены пищевых продуктов.

Положения о подготовке проб, предусмотренные в пунктах 30-39, применяются и для контроля уровней недиоксиноподобных ПХБ в пищевых продуктах.

70. Применяются следующие методы обнаружения:

1) газовая хроматография/детектирование с электронным захватом (в дальнейшем – ГХ-ДЭЗ);

2) газовая хроматография/масс-спектрометрия низкого разрешения (в дальнейшем – ГХ-МСНР);

3) ГХ-МС/МС;

4) ГХ-МСВР или эквивалентные методы.

71. При идентификации и подтверждении интересующих аналитов принимается во внимание:

1) относительное время удерживания по отношению к внутренним стандартам или эталонам (допустимое отклонение ± 0,25 %);

2) газохроматографическое разделение неоксоксиноподобных ПХБ от мешающих веществ, особенно коэлюирующих ПХБ, в частности, если уровни образцов находятся в диапазоне законных ограничений и несоблюдение должно быть подтверждено;

3) для методов ГХ-МС:

а) мониторинг, по меньшей мере, следующего количества молекулярных ионов или характерных ионов из молекулярного кластера:

- два иона, характерные для МСВР;

- три иона, характерные для МСНР;

- два конкретных иона-прекурсора, каждый из которых имеет один конкретный соответствующий ион переходного продукта для МС-МС;

b) максимально допустимые допуски для коэффициентов избыточности выбранных фрагментов массы: Относительное отклонение коэффициента избыточности выбранных фрагментов массы от теоретического значения или калибровочного стандарта для целевого иона (наиболее широко контролируемый ион) и определяющего иона (ионов) ± 15%;

4) для ГХ-ДЭЗ:

подтверждение результатов, превышающих максимальный уровень, с двумя колонками ГХ со стационарными фазами различной полярности.

72. Валидация в диапазоне максимального уровня (от 0,5 до 2-кратного максимального уровня) с приемлемым коэффициентом вариации для повторного анализа.

73. Сумма ПКО неоксоксиноподобных ПХБ не превышает одной трети максимального уровня.

74. Контроль качества осуществляется путем проведения периодических проверок холостых проб, анализа обогащенных проб, проб для проверки качества, участия в межлабораторных исследованиях соответствующих матриц.

75. Контроль восстановлений осуществляется путем:

1) использования подходящих внутренних стандартов с физико-химическими свойствами, сопоставимыми со свойствами интересующих аналитов;

2) добавления внутренних стандартов:

a) добавление к продуктам (до процесса экстрагирования и очистки);

b) возможное добавление и для экстрагирования жира (до процесса очистки), если максимальный уровень отражен отчетностью по содержанию жиров.

3) соблюдения требований к методам, использующим все шесть изотопно-меченых неоксоксиноподобных конгенеров ПХБ:

а) коррекция результатов для восстановления внутренних стандартов;

b) обычно приемлемые восстановления внутренних изотопно-меченых стандартов составляют от 60 до 120%;

c) приемлемы более низкие или более высокие восстановления для отдельных конгенеров со вкладом в сумму недиоксиноподобных ПХБ ниже 10%.

4) соблюдения требований к методам, использующим не все шесть изотопно-меченых внутренних стандартов, или к другим внутренним стандартам:

a) контроль восстановления внутреннего стандарта (внутренних стандартов) для каждого образца;

b) допустимые восстановления внутреннего стандарта (внутренних стандартов) от 60 до120%;

c) коррекция результатов для восстановления внутренних стандартов;

5) восстановления немаркированных конгенеров проверяется с помощью обогащенных образцов или образцов контроля качества с концентрациями в диапазоне максимального уровня. Допустимые восстановления для этих конгенеров составляют от 60 до 120%.

76. В соответствии с положениями Закона № 50/2013 об официальном контроле с целью проверки соответствия кормовому и пищевому законодательству и правилам, касающимся здоровья и благополучия животных, лаборатории должны быть аккредитованы согласно национальному стандарту SM SR EN ISO/IEC 17025:2018 "Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий".

77. Показатели производительности для суммы недиоксиноподобных ПХБ на максимальном уровне приведены в таблице 7.

78. Отчетность по результатам:

1) аналитические результаты содержат уровни отдельных конгенеров недиоксиноподобных ПХБ и сумму недиоксиноподобных ПХБ, сообщаемых как нижняя граница, верхняя граница и средняя граница для включения максимума информации при сообщении результатов и, тем самым, обеспечивать интерпретацию результатов в соответствии со специальными требованиями;

2) отчет включает и метод, используемый для экстрагирования ПХБ и липидов. Содержание липидов в образце определяется и сообщается для пищевых матриц с максимальными уровнями, выраженными на жировой основе, и с ожидаемой концентрацией жира в диапазоне 0-2 % (в соответствии с существующим законодательством). Для других образцов определение содержания липидов является необязательным;

3) информация по показателям восстановления отдельных внутренних стандартов должна быть доступна в случае, если восстановления находятся за пределами диапазона, указанного в пункте 75, и в случае, если максимальный уровень превышен, а в других случаях – по запросу;

4) поскольку расширенная неопределенность измерений должна учитываться при принятии решения относительно соответствия пробы, соответствующий параметр также должен быть доступен. Таким образом, аналитические результаты сообщаются как х ±U, где х – аналитический результат, а U – расширенная неопределенность измерений с коэффициентом охвата 2, который дает уровень достоверности, равный 95%;

5) результаты выражаются в тех же единицах и с таким же количеством значимых цифр, что и максимальные уровни, предусмотренные в Постановлении Правительства № 520/2010 об утверждении Санитарного регламента о загрязнителях в пищевых продуктах.