Постановление № 699 от 11.07.2018

ПРАВИТЕЛЬСТВО РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА

ПОСТАНОВЛЕНИЕ

об утверждении Ветеринарно-санитарной нормы,

устанавливающей условия относительно здоровья

при передвижении и импорте лошадиных

№ 699  от  11.07.2018

 (в силу 10.09.2018) 

Мониторул Офичиал ал Р. Молдова № 295-308 ст. 836 от 10.08.2018

* * *

На основании части (1) статьи 29 Закона № 221-XVI от 19 октября 2007 года о ветеринарно-санитарной деятельности (повторное опубликование: Официальный монитор Республики Молдова, 2013 г., № 125-129, ст.396), с последующими изменениями и дополнениями, Правительство

ПОСТАНОВЛЯЕТ:

1. Утвердить Ветеринарно-санитарную норму, устанавливающую условия относительно здоровья при передвижении и импорте лошадиных (прилагается).

2. Контроль за исполнением настоящего постановления возложить на Национальное агентство по безопасности пищевых продуктов.

Утверждено

Постановлением Правительства

№ 699 от 11 июля 2018 г.

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ НОРМА,

устанавливающая условия относительно здоровья

при передвижении и импорте лошадиных

Ветеринарно-санитарная норма, устанавливающая условия относительно здоровья при передвижении и импорте лошадиных (в дальнейшем – Норма), перелагает положения Директивы 2009/156/EC Совета от 30 ноября 2009 года о требованиях к здоровью животных, регулирующей перемещение и импорт лошадиных, опубликованной в Официальном журнале Европейского Союза, № L 192 от 23 июля 2010 года, с последними поправками, внесенными Решением о введении в действие (ЕС) 2016/1840 Комиссии, опубликованном в Официальном журнале Европейского Союза, № L 280 от 18 октября 2016 г., а также положения Решения Комиссии № 95/329/ЕС от 25 июля 1995 года по определению категорий самцов лошадиных, к которым применяется требование относительно вирусного артерита, предусмотренное в подпункте (ii) пункта (b) статьи 15 Директивы 90/426/ЕЭС Совета.

Глава 1

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1. Настоящая Норма устанавливает требования к здоровью животных при передвижении и импорте живых лошадиных.

2. Для целей настоящей Нормы используемые понятия имеют следующие значения:

объект – любая сельскохозяйственная или тренировочная единица, конюшня или любое пространство либо устройство, в которых обычно содержатся или выращиваются лошадиные, независимо от их использования;

центр по заготовке – объект, в котором собираются, содержатся лошадиные, и, при необходимости, повергаются обработкам или лабораторным исследованиям определенный период времени, независимо от их использования, авторизованным компетентным ветеринарно-санитарным органом на основании Закона № 221-XVI от 19 октября 2007 года о ветеринарно-санитарной деятельности, Закона о животноводстве № 412-XIV от 27 мая 1999 года, разрешительного документа, включенного в Перечень разрешительных документов из приложения 1 к Закону № 160 от 22 июля 2011 года о регулировании предпринимательской деятельности путем разрешения;

лошадиные – дикие или домашние животные вида лошадиных (в том числе зебры) или ослы либо животные, полученные в результате их скрещивания;

зарегистрированные лошадиные – лошадиныe, зарегистрированныe в соответствии с зоотехническими и генеалогическими условиями посредством идентификационного документа, выданного компетентным органом (на настоящий момент ГП "Centrul informational Agricol", находящееся в процессе слияния), который администрирует генеалогический лист или регистр для данной породы лошадиных и лошадей для состязаний или скачек, на основании статей 7-9 Закона № 231 -XVI от 20 июля 2006 года об идентификации и регистрации животных, а также Закона о животноводстве № 412-XIV от 27 мая 1999 года;

лошадиные, предназначенные для убоя, – лошадиные, предназначенные для прямой перевозки или после их пребывания в заготовительном центре на бойню для убоя;

лошадиные для воспроизводства или производства – лошадиные, за исключением зарегистрированных и предназначенных для убоя;

страна, свободная от африканской чумы лошадей, – любая страна, на территории которой не выявлен ни один клинический, серологический (у невакцинированных лошадиных) или эпидемиологический признак африканской чумы лошадей в течение последних двух лет, и в которой не проводилась вакцинация против этого заболевания в последние 12 месяцев;

болезни обязательной декларации – болезни, указанные в приложении № 1;

временное признание – статус зарегистрированных лошадиных, происходящих из страны и допущенных на территорию другой страны на период до 90 дней, с учетом ситуации, связанной с состоянием здоровья в стране происхождения.

Глава II

ТРЕБОВАНИЯ К ПЕРЕДВИЖЕНИЮ ЛОШАДИНЫХ

Раздел 1

Общие требования

3. Разрешается передвижение лошадиных, зарегистрированных на территории страны, или импорт лошадиных из другой страны только в случае, если животные отвечают требованиям, установленным настоящим разделом.

При благополучной эпизоотической обстановке относительно болезней, указанных в приложении № 1, для лошадей разрешается:

a) перегон или перевозка для спортивных или рекреационных целей по дорогам, расположенным вблизи внутренних границ;

b) участие в культурных или подобных мероприятиях, организованных органами местного публичного управления, расположенными вблизи внутренних границ;

c) исключительно временный выпас или работа вблизи границ страны.

4. У лошадиных не должно наблюдаться никаких клинических признаков болезни при инспектировании в пределах 48 часов, предшествующих их посадке или загрузке, и они должны быть зарегистрированы.

5. Без ущерба для положений, касающихся болезней, обязательно объявленных и указанных в приложении № 1 к настоящей Норме, официальный ветеринарный врач должен убедиться в ходе проверки, что не существует причин (в частности, на основании заявления владельца или ухаживающего персонала) для вывода, что лошадиные контактировали с лошадиными с инфекционной или контагиозной болезнью в течение 15 дней непосредственно до инспекции.

6. Лошадиные не должны быть предназначены для убоя в рамках национальной программы по ликвидации контагиозных и инфекционных болезней.

7. Лошадиные должны быть идентифицированы следующим образом:

1) в случае зарегистрированных лошадиных посредством идентификационного документа, подтверждающего, в частности, соблюдение положений настоящего раздела, а если имеются запреты, официальный ветеринарный врач должен приостановить действие идентификационного документа на период запрета, и после убоя зарегистрированной лошади идентификационный документ необходимо возвратить выдавшему его органу;

2) в случае лошадиных для воспроизводства и производства, в соответствии с положениями Постановления Правительства № 137 от 10 февраля 2009 г. "Об утверждении Ветеринарно-санитарной нормы, касающейся требований к здоровью животных и ветеринарно-санитарной сертификации при импорте зарегистрированных лошадиных и лошадиных для воспроизводства и производства".

8. Лошадиные не должны происходить из объекта, который был предметом одной из следующих запретительных мер:

1) если все животные видов, восприимчивых к болезни, находящиеся на соответствующем объекте, не были забиты, период запрета относительно объекта происхождения должен составлять по меньшей мере:

a) шесть месяцев, в случае лошадиных с подозрением на случную болезнь, начиная с даты последнего реального или возможного контакта с больным животным. В случае жеребца, запрет применяется до тех пор, пока животное не будет кастрировано;

b) шесть месяцев, в случае сапа или энцефаломиелита лошадиных, начиная со дня убоя лошадиных, страдающих этим заболеванием;

c) в случае инфекционной анемии до даты, когда после убоя инфицированных животных у оставшихся животных наблюдается отрицательная реакция на два теста Коггинса, проведенных с интервалом в три месяца;

d) шесть месяцев, в случае везикулярного стоматита;

e) один месяц, начиная с последнего зарегистрированного случая, при обнаружении бешенства;

f) 15 дней, начиная с последнего зарегистрированного случая, при обнаружении сибирской язвы;

2) если все животные видов, восприимчивых к заболеванию, находившиеся на объекте, были забиты, а помещения продезинфицированы, период запрета составляет 30 дней с даты удаления животных и дезинфицирования помещений, за исключением сибирской язвы, срок запрета для которой составляет 15 дней.

9. Запретные меры, предусмотренные в пункте 8, не применяются в отношении ипподромов и беговых дорожек, при минимальных рисках распространения инфекций.

10. В случае, если Национальное агентство по безопасности пищевых продуктов разрабатывает или располагает программой контроля за борьбой с одним из заболеваний, к которому чувствительны лошадиные, оно должно учитывать, в частности:

1) распространение заболевания на ее территории;

2) значение болезни и программы с точки зрения ее стоимости/пользы;

3) географическую область, в которой будет применяться программа;

4) различные категории статусов, применяемых к объектам, стандарты, которые необходимо достичь в отношении каждого вида, и процедуры тестирования, которые следует использовать;

5) процедуры мониторинга программы;

6) действия, которые необходимо предпринять, независимо от того, по какой причине объект теряет свой статус;

7) меры, которые необходимо предпринять, если результаты проверок, проведенных в соответствии с положениями программы, оказались положительными;

8) недискриминационный характер торгового обмена в отношении лошадиных.

Раздел 2

Требования в случае африканской чумы лошадей

11. Разрешается импорт лошадиных из страны, которая не считается инфицированной африканской чумой, только с той части ее территории, которая считается инфицированной, при соблюдении положений и условий, установленных в настоящем разделе.

12. Часть территории страны считается пораженной африканской чумой лошадей в случае, если клинический, серологический (у невакцинированных лошадиных) или эпидемиологический признак подтвердил наличие африканской чумы в течение последних двух лет, или была проведена вакцинация против африканской чумы в течение последних 12 месяцев.

Часть территории, которая считается пораженной африканской чумой лошадей, должна включать, по крайней мере:

1) защитную зону радиусом не менее 100 км вокруг любого очага инфекции;

2) зону надзора, составляющую не менее 50 км за пределами защитной зоны, в которой в течение последних 12 месяцев не проводилась вакцинация.

13. На территориях или в зонах, отмеченных в пункте 12, применяют нормы контроля и меры по борьбе с африканской чумой лошадей, изложенные в Постановлении Правительства № 771 от 16 октября 2012 г. "Об утверждении Ветеринарно-санитарной нормы, касающейся африканской чумы лошадей", в частности те, которые определены в пунктах 5 и 11 указанной Нормы.

14. Все вакцинированные лошадиные, обнаруженные в защитной зоне, должны быть зарегистрированы и помечены.

Идентификационный документ и/или ветеринарно-санитарный сертификат (сертификат здоровья), выданный на основании Закона № 231-XVI от 20 июля 2006 года об идентификации и регистрации животных, Закона № 221-XVI от 19 октября 2007 года о ветеринарно-санитарной деятельности, Закона № 412-XIV от 27 мая 1999 года о животноводстве, другие разрешительные документы, включенные в Перечень разрешительных документов приложения 1 к Закону № 160 от 22 июля 2011 года о регулировании предпринимательской деятельности путем разрешения, должны содержать четкие данные относительно этой вакцинации.

15. Отправка лошадиных с территории, упомянутой в настоящем разделе, должна соответствовать следующим требованиям:

1) животных необходимо отправлять только в определенные периоды года, в зависимости от активности насекомых-векторов;

2) у животных не должно наблюдаться никаких клинических симптомов африканской чумы лошадей в день инспекции;

3) животные должны быть подвергнуты тесту на африканскую чуму лошадей, как это описано в настоящей Норме (или другому тесту, признанному на международном уровне), дважды в интервале, включающем от 21 до 30 дней между двумя тестами, второй должен быть выполнен в течение 10 дней до отправки, чтобы:

a) показать отрицательный результат, в случае если животные не были вакцинированы против африканской чумы лошадей; или

b) не было зарегистрировано повышение количества антител при проверке и не подвергались вакцинации в последние два месяца, в случае если животные были вакцинированы против африканской чумы лошадей;

4) животные должны содержаться на карантинном объекте в течение не менее 40 дней до отправки;

5) животные должны быть защищены от насекомых-векторов во время карантинного периода и во время транспортировки из карантинного объекта в место отправки.

16. В случае применения альтернативной системы контроля, экспортирующая страна:

a) должна предоставлять гарантии, эквивалентные предусмотренным в пунктах 8-10 в отношении перемещения на своей территории лошадиных; и

b) на основе соблюдения принципа взаимности между странами (двусторонние отношения между странами) может просить отступления от положений пункта 4.

17. Лошадиные должны перевозиться с соблюдением положений, указанных в Ветеринарнo-санитарной норме о защите и благополучии животных во время перевозки, утвержденной Постановлением Правительства № 793 от 22 октября 2012 года, в частности:

1) незамедлительно от места происхождения к месту назначения или, непосредственно, через сборный центр;

2) в транспортных средствах или контейнерах, которые:

a) очищены и продезинфицированы до загрузки и выгрузки животных;

b) сконструированы таким образом, чтобы навоз, соломенные подстилки или корм не могли выпасть из транспортного средства во время транспортировки;

3) обеспечивая их здоровье и благополучие;

4) соблюдая положения пункта 6 вышеуказанной Нормы.

18. Требования, изложенные в пунктах 8 – 10 настоящей Нормы, не применяются к любому животному со специальной меткой, указывающей, что оно предназначено для убоя, при условии, что:

a) это будет отмечено в ветеринарно-санитарном сертификате (сертификат здоровья);

b) лошадиные, предназначенные для убоя, должны быть перевезены непосредственно на уполномоченную бойню и забиты в течение пяти дней с момента прибытия на бойню.

19. Официальный ветеринарный врач должен зарегистрировать идентификационный номер или номер идентификационного документа забитого животного и подтвердить компетентному органу экспортирующей страны, по его запросу, что животное было забито.

20. Компетентный ветеринарно-санитарный орган проверяет, чтобы лошадиные, предназначенные для отправки, были зарегистрированы и сопровождены идентификационным документом и ветеринарно-санитарным сертификатом (сертификатом здоровья) в соответствии с образцом, установленным настоящей Нормой.

Ветеринарно-санитарный сертификат (сертификат здоровья) заполняется в течение 48 часов, предшествующих загрузке, или в последний рабочий день, предшествующий загрузке, на одном из официальных языков страны-экспортера и страны назначения или с его заверенным переводом.

Ветеринарно-санитарный сертификат (сертификат здоровья) или аттестат здоровья действителен 10 дней и должен состоять из одного листа.

Партии зарегистрированных лошадиных могут быть заверены одним ветеринарно-санитарным сертификатом на каждую партию (сертификат здоровья) вместо индивидуального сертификата здоровья.

21. Нормы, предусмотренные Постановлением Правительства № 1099 от 29 сентября 2008 г. "Об утверждении ветеринарно-санитарных норм по проведению ветеринарно-санитарных проверок при импорте животных", применяются, в частности, в отношении проверок, проводимых по месту происхождения, организации и последующих проверок, которые будут осуществляться на территории Республики Молдова.

22. Международные ветеринарные эксперты:

а) могут, в той мере, в какой это необходимо для обеспечения единообразного применения настоящей Нормы, и в сотрудничестве с Национальным агентством по безопасности пищевых продуктов проводить инспекции на месте;

b) запрашивают и получают необходимую поддержку для выполнения задач, предоставленную Национальным агентством по безопасности пищевых продуктов;

c) информируют Национальное агентство по безопасности пищевых продуктов о результатах проведенных проверок.

Глава III

ТРЕБОВАНИЯ ПРИ ИМПОРТЕ ЛОШАДИНЫХ

23. Разрешается импорт лошадиных только из стран или только из части этих стран, включенных в список, составленный, обновленный и доведенный до сведения общественности путем размещения на веб-странице Национального агентства по безопасности пищевых продуктов

При составлении списка стран, из которых разрешается импорт, принимается во внимание способ, которым страна-экспортер применяет и внедряет на своей территории соответствующие международные стандарты, в частности, принцип районирования в отношении требований по охране здоровья животных для импорта, предусмотренных в настоящей Норме.

24. При составлении списка, предусмотренного в пункте 23, учитывается, в частности, следующее:

1) статус здоровья лошадиных, других домашних животных и дикой природы в стране отправления, уделяя особое внимание заболеваниям экзотических животных и всем аспектам, связанным с общей ситуацией в области здоровья животных и окружающей среды в стране, в той мере, в какой это может представлять риск для статуса здоровья животных и окружающей среды;

2) законодательство страны-экспортера в отношении здоровья и благополучия животных;

3) организация компетентного санитарно-ветеринарного органа и его инспекционных служб, прерогативы этих служб, надзор, который на них распространяется, а также средства в их распоряжении, включая персонал и мощности лаборатории для адекватного применения национального законодательства;

4) гарантии, которые может предложить компетентный санитарно-ветеринарный орган страны-экспортера относительно соблюдения условий здоровья животного или применения эквивалентных условий;

5) членство страны-экспортера в Международной организации по охране здоровья животных (МЭБ), а также регулярность и быстрота, с которой эта страна предоставляет информацию о наличии инфекционных или заразных заболеваний лошадиных на своей территории, в частности, заболеваний, учитываемых МЭБ, указанных в настоящей Норме;

6) гарантии, предоставляемые страной-экспортером относительно прямого распространения информации международным организациям:

а) в течение 24 часов о подтверждении наличия инфекционных болезней лошадиных, перечисленных в приложении I, и любых изменениях в политике вакцинации в отношении этих заболеваний;

b) в течение соответствующего периода времени о любых предложенных изменениях в национальных нормах здоровья относительно лошадиных, в частности, касающихся импорта;

c) через равные промежутки времени о состоянии здоровья животных на ее территории в отношении лошадиных;

7) любой опыт, накопленный в области импорта живых лошадиных, происходящих из других стран, и результаты возможных проверок, проведенных при импорте;

8) результаты проверок и/или внешнего аудита, проведенных в стране-экспортере, в частности, результаты оценки компетентных органов или отчет компетентных органов об инспекциях, которые они провели;

9) содержание норм, действующих в стране, относительно борьбы с инфекционными или заразными заболеваниями животных и их предупреждения, в том числе правил, касающихся импорта лошадиных, происходящих из других стран, а также введение в действие этих норм.

25. Лошадиные должны происходить из стран, которые:

1) свободны от африканской чумы лошадей;

2) на протяжении двух лет являются свободными от венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ);

3) на протяжении шести месяцев являются свободными от случной болезни и сапа.

В случае, если требования относительно африканской чумы лошадей применяются на региональном уровне, необходимо соблюдать, по необходимости, меры, предусмотренные в пунктах 12-15.

26. До даты загрузки для перевозки в страну назначения лошадиные должны:

1) непрерывно оставаться (в карантине) на территории или на части своей территории; и

2) происходить из объекта, находящегося под ветеринарным контролем.

27. Импорт лошадиных с территории страны или части территории стран, которые фигурируют в составленном списке, допускается только в случае, если лошадиные помимо требований, установленных пунктом 25:

1) соответствуют требованиям к здоровью животных, указанным в пунктах 4-15, для импорта лошадиных из соответствующей страны, в зависимости от вида и категорий лошадиных; и

2) в случае некоторых стран, не являющихся свободными от везикулярного стоматита или вирусного артериита в течение минимум шести месяцев, лошадиные должны отвечать следующим требованиям:

a) происходить из объекта, свободного от везикулярного стоматита не менее шести месяцев, и должны демонстрировать отрицательные результаты в реакции в серологическом тесте, проведенном до отправки;

b) в случае вирусного артериита самцы лошадиных должны иметь отрицательные результаты в реакции в серологическом тестировании или в тесте на выделение вируса, или в любом другом признанном тесте, который может гарантировать, что животное является свободным от этого заболевания;

3) требования относительно вирусного артериита лошадей применяются к самцам лошадиных, за исключением:

а) лошадиных, вакцинированных против вирусного артериита лошадей под официальным наблюдением вакциной, зарегистрированной Национальным агентством по безопасности пищевых продуктов, на основании Закона № 221-XVI от 19 октября 2007 года о ветеринарно-санитарной деятельности, и которые имеют отрицательный результат реакции от одного до четырех в тесте сывороточной нейтрализации для этого заболевания. Лошадиные должны быть вакцинированы в день взятия образца крови или в течение следующих 15 дней при условии их изоляции в течение этого периода. Испытание необходимо проводить и сертифицировать, а результат и вакцинация должны быть сертифицированы под официальным ветеринарным надзором. Вакцинация повторяется через регулярные промежутки времени. В случае зарегистрированных лошадиных вакцинаций и результаты серологических тестов заносятся в идентификационный документ (паспорт);

b) лошадиных, вакцинированных против вирусного артериита лошадей под официальным наблюдением вакциной, утвержденной компетентным органом, и которые были подвергнуты двум тестам сывороточной нейтрализации для этого заболевания с интервалом не менее десяти дней в возрасте от 180 до 270 дней, без констатации увеличения уровня антител. Лошадиные необходимо изолировать под официальным наблюдением с момента первого отбора крови и до вакцинации. Испытания должны проводиться и сертифицироваться, а также результаты и прививки должны быть сертифицированы под официальным ветеринарным надзором. Вакцинацию необходимо повторять через регулярные промежутки времени. В случае зарегистрированных лошадиных, вакцинации и результаты серологических тестов заносятся в идентификационный документ (паспорт);

c) лошадиных в возрасте менее 180 дней;

d) лошадиных, предназначенных для убоя, непосредственно направленных на бойню, сопровождаемых ветеринарно-санитарным сертификатом относительно состояния здоровья животных, и ветеринарной сертификацией на импорт лошадиных для убоя.

28. Лошадиные должны быть идентифицированы и сопровождаться сертификатом здоровья (ветеринарно-санитарным сертификатом), заполненным официальным ветеринарным врачом страны-экспортера.

Сертификат здоровья (ветеринарно-санитарный сертификат) должен:

a) быть выдан на дату загрузки животных для отправления в Республику Молдова или, в случае зарегистрированных лошадиных, в последний рабочий день, предшествующий загрузке;

b) быть составлен на одном из официальных языков страны-экспортера и на государственном языке Республики Молдова или с приложением заверенного перевода на язык страны, в которой проводится инспектирование импорта;

c) сопровождать партию животных, в оригинале;

d) удостоверять, что животные отвечают требованиям настоящей Нормы и требованиям относительно импорта из других стран;

e) состоять из одного листа;

f) быть предусмотрен для одного получателя или, в случае животных, предназначенных для убоя, для одной партии, при условии, что животные отмечены и идентифицированы;

g) быть составлен в соответствии с образцом, приведенным в приложении № 3.

29. С момента ввоза в страну, лошадиные, предназначенные для убоя, непосредственно перевозятся на бойню либо после прохождения через заготовительный центр и забиты в соответствии с ветеринарно-санитарными требованиями, указанными в пункте 27.

Соблюдая специальные условия, Национальное агентство по безопасности пищевых продуктов, учитывая требования по здоровью животных, назначает бойню, на которую следует транспортировать этих лошадиных.

30. Проверки должны проводиться на месте ветеринарными экспертами обеих сторон для проверки применения положений настоящей Нормы.

В случае выявления серьезных нарушений на авторизованном объекте при проведение проверок, немедленно принимается решение о временном приостановлении разрешения на импорт в соответствии с положениями Закона № 221-XVI от 19 октября 2007 года о ветеринарно-санитарной деятельности, статьи 28 Закона № 306/2018 о безопасности пищевых продуктов, Закона № 50 от 28 марта 2013 года об официальном контроле с целью проверки соответствия кормовому и пищевому законодательству и правилам, касающимся здоровья и благополучия животных, Закона № 131 от 8 июня 2012 года о государственном контроле предпринимательской деятельности, Закона № 235-XVI от 20 июля 2006 года об основных принципах регулирования предпринимательской деятельности.

[Пкт.30 изменен Пост.Прав. N 13 от 27.01.2021, в силу 19.03.2021]

31. Импорт из страны или части стран может быть ограничен определенными видами или категориями лошадиных в специальных условиях для временного ввоза зарегистрированных лошадиных или лошадиных, предназначенных для специального использования или возвращения их на территорию страны после их временного вывоза, установленных Постановлением Правительства № 882 от 28 декабря 2015 г. "Об утверждении Ветеринарно-санитарной нормы по требованиям к здоровью и ветеринарно-санитарной сертификации для временного ввоза зарегистрированных лошадей".

Национальная референтная лаборатория в области ветеринарии и безопасности пищевых продуктов (Публичное учреждение Республиканский ветеринарно-диагностический центр) должна сотрудничать с международной референтной лабораторией, отвечающей за диагностику одного или нескольких инфекционных заболеваний лошадиных.

Приложение № 1

к Ветеринарно-санитарной

норме, устанавливающей

условия относительно здоровья при

передвижении и импорте лошадиных

Болезни обязательной декларации

Следующие болезни нужно декларировать в обязательном порядке:

1) случная болезнь

2) сап

3) энцефаломиелит лошадей (всех типов, в том числе ВЭ)

4) инфекционная анемия

5) бешенство

6) сибирская язва

7) африканская чума лошадей

8) везикулярный стоматит

Приложение № 2

к Ветеринарно-санитарной

норме, устанавливающей

условия относительно здоровья при

передвижении и импорте лошадиных

Диагностика африканской чумы лошадей

Часть A

Серологические тесты

Серологический метод, описанный далее, представляет собой иммуносорбентный анализ с мечеными ферментами антителами (ИФА), основанный на пункте 2 раздела B главы 2.5.1 Руководства по диагностическим тестам и вакцинам для наземных животных, выпуск 2016 года, принятый Всемирной ассамблеей делегатов Всемирной организации по охране здоровья животных в мае 2012 года.

Вирусный белок VP7 является основным иммунодоминантным антигеном вируса африканской чумы лошадей (ВАЧЛ) и есть во всех девяти серотипах ВАЧЛ. Было показано, что рекомбинантные белки VP7 ВАЧЛ являются стабильными, безопасными и пригодными для использования в качестве антигенов в процедурах ИФА для определения антител анти-ВАЧЛ с высокой степенью чувствительности и специфичности. Непрямой ИФА и ИФА блокировки представляют два метода ИФА АЧЛ-VP7, подходящих для серологического диагноза африканской чумы лошадей (АЧЛ).

1. Непрямой ИФА для обнаружения антител против вируса африканской чумы лошадей (ВАЧЛ)

Конъюгат, используемый в этом методе, представляет собой антилошадиный гамма глобулин, конъюгированный с пероксидазой хрена, который реагирует с сывороткой крови лошади, мула и осла. Описанный способ использует в качестве конъюгата белок G, который реагирует с сывороткой крови зебры.

Антиген может быть предоставлен Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA) (Центр исследований здоровья животных) из Испании в течение 4-6 месяцев с момента получения запроса.

1.1. Процедура тестирования

1.1.1. Твердая фаза

1.1.1.1. Налить в планшеты ИФА рекомбинантный белок VP7 ВАЧЛ серотипа 4, разведенный в карбонатно/бикарбонатном буфере с pH 9,6. Инкубировать планшеты в течение ночи при температуре 4 °C.

1.1.1.2. Промыть планшеты пять раз дистиллированной водой, содержащей 0,01 % (О/О) ТВИН-20 (раствор для промывки). Аккуратно обтереть пластины абсорбирующим материалом, чтобы удалить следы воды.

1.1.1.3. Блокировать планшеты фосфатным буферным солевым раствором (ФБР) с pH 7,2 + 5 % (В/О) сухого обезжиренного молока (Nestlé Dry Skim Milk TM), по 200 мкл в каждую лунку в течение одного часа при 37 ° С.

1.1.1.4. Удалить блокирующий раствор и аккуратно встряхнуть планшет над абсорбирующим материалом.

1.1.2. Образцы для испытаний

1.1.2.1. Образцы тестируемой сыворотки и контрольных положительной и отрицательной сывороток развести 1/25 в ФБР + 5 % (В/О) сухого обезжиренного молока + 0,05 % (О/О) ТВИН-20, 100 мкл в каждую лунку. Инкубировать в течение одного часа при температуре 37 °C.

Для титрования выполнить серии двукратного разведения от 1 к 25 (100 мкл/лунку), используя по одной сыворотке для одной колонки планшета; то же самое произвести с положительными и отрицательными образцами. Инкубировать в течение одного часа при температуре 37 °C.

1.1.2.2. Промыть планшеты пять раз дистиллированной водой, содержащей 0,01 % (О/О) ТВИН-20 (раствор для промывки). Аккуратно обтереть пластины абсорбирующим материалом, чтобы удалить следы воды.

1.1.3. Конъюгат

1.1.3.1. Разлить в каждую лунку по 100 мкл антилошадиного гамма глобулина, конъюгированного с пероксидазой хрена, разведенного в ФБР + 5 % молока + 0,05 % ТВИН-20 с pH 7,2. Инкубировать в течение одного часа при температуре 37 °C.

1.1.3.2. Промыть планшеты пять раз дистиллированной водой, содержащей 0,01 % (О/О) ТВИН-20 (раствор для промывки). Аккуратно обтереть пластины абсорбирующим материалом, чтобы удалить следы воды.

1.1.4. Хромоген/субстрат

1.1.4.1. Добавить 200 мкл/лунку раствора хромоген/ субстрат [10 мл ДМАБ (диметиламинобензальдегид) 80,6 мМ + 10 мл МБТГ (гидрохлорид гидразона 3-метил-2-бензотиазолина) 1,56 мМ + 5 мкл H₂O₂].

Блокировать колориметрическую реакцию примерно через 5-10 минут (прежде чем отрицательный контроль начнет окрашиваться), добавив 50 мкл H₂SO₄ 3N.

Могут быть использованы другие хромогены, такие как AБТС [2,2′-Азино-бис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота)], ТМБ (тетраметилбензидин ) или ОФД (ортофенилдиамин).

1.1.4.2. Снять показатели с планшетов при 600 нм (или 620 нм).

1.2. Интерпретация результатов

1.2.1. Рассчитать пороговое значение путем добавления 0,06 к показателю отрицательного контроля (0,06 стандартное отклонение, полученное с группой 30 отрицательных сывороток).

1.2.2. Образцы для тестирования, дающие показатели абсорбции ниже, чем пороговое значение, считают отрицательными.

1.2.3. Образцы для тестирования, дающие показатели абсорбции больше, чем пороговое значение +0,15, считают положительными.

1.2.4. Образцы для тестирования, дающие средние показатели абсорбции, являются сомнительными, и следует использовать второй метод, чтобы подтвердить результат.

2. Блокирующий метод ИФА для выявления антител к вирусу африканской чумы лошадей (ВАЧЛ)

Блокирующий метод ИФА разработан, чтобы выявить специфические антитела к вирусу африканской чумы лошадей в сыворотках от восприимчивых видов лошадиных, а именно: лошадей, ослов, зебр и их гибридов, что предотвращает проблему специфичности, которая иногда встречается при использовании косвенных ИФА.

Принцип теста заключается в прерывании реакции между рекомбинантным VP7, поглощенным на планшете ИФА, и конъюгированным моноклональным антителом, специфичным для VP7 АЧЛ (Mab). Антитела в тестовых сыворотках заблокируют реакцию между антигеном и Mab, что приводит в результате к редукции цвета. Поскольку Mab направлено против белка VP7, тест будет очень чувствительным и очень специфичным.

Блокирующий метод ИФА является коммерчески доступным.

2.1. Процедура тестирования

2.1.1. Твердая фаза

2.1.1.1. Налить в планшеты ИФА 50-100 нг рекомбинантного белка VP7 ВАЧЛ серотипа 4, разведенного в карбонатно-бикарбонатном буфере с pH 9,6. Инкубировать в течение ночи при температуре 4 °C.

2.1.1.2. Промыть планшеты три раза фосфатным буферным солевым раствором (ФБР) 0,1x, содержащим 0,135 М NaCl и 0,05 % (О/О) ТВИН-20 (ФБРТ). Аккуратно обтереть пластины абсорбирующим материалом, чтобы удалить следы воды.

2.1.2. Образцы для испытаний и контроля

2.1.2.1. Образцы тестируемой сыворотки и контрольных положительной и отрицательной сывороток развести 1 к 5 в разбавителе, содержащем 0,35 М NaCl, 0,05 % (О/О) ТВИН-20 и 0,1 % катона, 100 мкл в каждую лунку. Инкубировать в течение одного часа при температуре 37 °C.

Для титрования выполнить серии двукратного разведения испытываемых сывороток с 1 к 10 до 1 к 280 через 8 лунок (100 мкл / лунка), используя по одной сыворотке для одной колонки планшета; то же самое произвести с положительными и отрицательными образцами. Инкубировать в течение одного часа при температуре 37 °C.

2.1.2.2. Промыть планшеты пять раз фосфатным буферным солевым раствором (ФБР) 0,1x, содержащим 0,135 М NaCl и 0,05 % (О/О) ТВИН-20 (ФБРТ). Аккуратно обтереть пластины абсорбирующим материалом, чтобы удалить следы воды.

1.1.3. Конъюгат

2.1.3.1. Добавить в каждую лунку по 100 мкл Mab анти-VP7, конъюгированное с пероксидазой хрена. Перед этой операцией Mab соответственно следует развести 1/5 000 -1/15 000 в растворе 1/1 стабилизатора StabiliZyme Select® (ссылка SurModics.: SZ03) в дистиллированной воде. Инкубировать на 30 минут при 37 °C.

2.1.3.2. Промыть планшеты пять раз фосфатным буферным солевым раствором (ФБР) 0,1x, содержащим 0,135 М NaCl и 0,05 % (О/О) ТВИН-20 (ФБРТ). Аккуратно обтереть пластины абсорбирующим материалом, чтобы удалить следы воды.

2.1.4. Хромоген / субстрат

Добавить в каждую лунку по 100 мкл раствора хромоген/субстрат, то есть 1 мл AБТС [2,2′-азино-бис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота)] 5 мг / мл + 9 мл буферного раствора субстрата (0,1 М фосфат-цитратного буфера с pH 4, содержащего 0,03 % H₂O₂), затем выдержать в течение 10 минут при температуре окружающей среды. Блокировать колориметрическую реакцию, добавляя в каждую лунку по 100 мкл ДСН (додецилсульфат натрия) 2 % (В/О).

2.1.5. Чтение

Считать при 405 нм с помощью ИФА ридера.

2.2. Интерпретация результатов

2.2.1. Определение процента блокировки (ПБ) каждого образца по следующей формуле, где "Abs" означает антитела:

2.2.2. Образцы с ПБ выше 50% должны считаться положительными для антител ВАЧЛ.

2.2.3. Образцы с ПБ ниже 50% должны считаться отрицательными для антител ВАЧЛ.

2.2.4. Образцы с BP от 45% до 50% следует считать неубедительными и следует подвергнуть повторному тестированию. Если результат все еще неубедителен, животных следует повторно протестировать на основе образцов, взятых не ранее чем через две недели после проведения выборки, считающейся неубедительной.

Часть B

Идентификация агента

Обратная транскрипция с последующей полимеразной цепной реакцией в реальном времени (ОТ-ПЦР РВ)

Тесты идентификации агента на основе методов, в которых используются нуклеиновые кислоты, должны определять референтные штаммы девяти серотипов ВАЧЛ.

Метод, описанный в пункте 2.1, основан на пункте 1.2 раздела B главы 2.5.1 Руководства по диагностическим тестам и вакцинам для наземных животных, выпуск 2016 года, принятом Всемирной ассамблеей делегатов МЭБ в мае 2012 года.

Любой метод обнаружения на основе ОТ-ПЦР, который используется для тестирования образцов, либо крови, либо селезенки, в контексте Директивы 2009/156/CE, должен быть, по меньшей мере, столь же чувствительным, как и методологии, описанные в пункте 2.

Референтные штаммы инактивированного вируса из серотипов 1-9 могут быть получены из Справочной лаборатории Европейского Союза или из справочной лаборатории МЭБ по африканской чуме лошадей из Альхете, Испания.

1. Экстракция вирусной РНК

Для того чтобы обеспечить хорошую реакцию, необходимо извлечь из образца РНК ВАЧЛ высокого качества. Экстракция нуклеиновых кислот из клинических образцов может быть осуществлена с помощью множества внутренних методов и доступных коммерческих методов.

Коммерческие наборы используют различные методы для выделения РНК. Большинство из них основаны на одной из следующих процедур:

- фенол-хлороформная экстракция нуклеиновых кислот;

- адсорбции нуклеиновых кислот в системе фильтрации;

- адсорбции нуклеиновых кислот в системе с магнитными шариками;

Пример внутренней экстракции РНК приведен ниже:

1.1. 1 г образца ткани гомогенизируют в 1 мл денатурирующего раствора (гуанидина тиоцианата 4 М, цитрата натрия 25 мМ, 2 -меркаптоэтанола 0,1 M, саркозила 0,5 %).

1.2. После центрифугирования в супернатант добавляют 1 мкг дрожжевой РНК, 0,1 мл 2 М ацетата натрия 2 M с pH 4, 1 мл фенола и 0,2 мл смеси хлороформ/изоамиловый спирт (49/1).

1.3. Суспензию энергично встряхивают и охлаждают на льду в течение 15 минут.

1.4. После центрифугирования РНК, присутствующая в водной фазе, экстрагируется фенолом, осаждается этанолом и ресуспендируется в стерильной воде.

2. Процедура ОТ-ПЦР в режиме реального времени

2.1. ОТ-ПЦР для конкретной группы

Эта ОТ-ПЦР в режиме реального времени определяет группу, нацеленную на белок VP7 ВАЧЛ, и может обнаруживать все известные серотипы и штаммы ВАЧЛ, циркулирующие в настоящее время. Она была успешно использована национальными справочными лабораториями в государствах-членах Европейского Союза, которые участвовали в ежегодных тестах на компетентность, организованных Справочной лабораторией Европейского Союза за период 2009-2015 годов. Кроме того, во время межлабораторных испытаний, проведенных в 2015 году в сети справочных лабораторий Всемирной организации по охране здоровья животных, этот протокол был классифицирован на очень высоком уровне по сравнению с другими.

Праймер и последовательности образцов для обнаружения вирусов вида ВАЧЛ:

2.1.1. Концентрацию праймерного раствора разбавляют до рабочей концентрации 8 мкМ ("рабочий раствор 8 мкМ праймера"), в то время как образец разбавляют до рабочей концентрации 50 мкМ ("рабочий раствор 50 мкМ образца"). План тестового планшета должен быть спроектирован и загружен в программное обеспечение машины ПЦР в реальном времени. Используя макет в качестве руководства, добавляют 2,5 мкл каждого рабочего раствора 8 мкМ праймера в каждую лунку, содержащую образцы РНК, положительные и/или отрицательные образцы (конечная концентрация праймера будет составлять 1 мкМ в 20 мкл смеси ОТ-ПЦР). Планшет выдерживается на льду.

2.1.2. 2 мкл изолированной РНК (тестовые образцы и положительный контрольный образец) или 2 мкл свободной от РНК воды в контрольных образцах с отрицательной реакцией смешивают с прямым и обратным праймерами. Эту смесь денатурируют нагреванием при 95 ° С в течение 5 минут с последующим быстрым охлаждением на льду в течение, по меньшей мере, 5 минут.

2.1.3. Подготавливают в соответствии с инструкциями производителя соответствующий объем основной смеси для ОТ-ПЦР в режиме реального времени в один этап для количества образцов, подлежащих тестированию. В каждую лунку, содержащую образцы РНК, добавляют 0,1 мкл рабочего раствора 50 мкМ образца (конечная концентрация образца должна составлять 0,25 мкМ в каждой лунке, содержащей образцы РНК). Распределяют в каждую лунку планшета ПЦР, содержащую РНК и денатурированные праймеры, 13 мкл основной смеси для ОТ-ПЦР в режиме реального времени в один этап.

2.1.4. Помещают планшет в термоциклер в режиме реального времени, запрограммированный для обратной транскрипции, и для обнаружения ДНК путем флуоресценции/амплификации. Условия амплификации состоят из первой стадии обратной транскрипции при 48°С в течение 25 минут, затем 10 минут при 95°C ("горячий старт") и 40 циклов по 15 секунд при 95°C, 35 секунд при 55°C и 30 секунд при 72°C (или 40 циклов при 97°C в течение 2 секунд и 55°C в течение 30 секунд, если используются реагенты и термоциклер, позволяющий быстрые реакции). Данные относительно флуоресценции получают в конце этапа 55°C.

2.1.5. Если получены атипичные кривые амплификации, тест не считается действительным и его следует повторить.

Образцы считаются положительными, если значение Ct (номер цикла, при котором флуоресценция, генерируемая в реакции, превышает порог флуоресценции) меньше или равно заданному порогу Ct (35) в течение максимум 40 циклов ПЦР (Ct ≤ 35).

Образцы считаются неубедительными, если значение Ct превышает заданный порог Ct (35) в течение максимум 40 циклов ПЦР (Ct> 35).

Образцы считаются отрицательными, если получена горизонтальная кривая амплификации, которая не пересекает пороговую линию в течение максимум 40 циклов ПЦР.

2.2. RT-PCR в реальном времени для конкретной группы.

ОТ-ПЦР в режиме реального времени, использующая флуоресцентный резонансный перенос энергии (ФРПЭ) для определения нуклеиновой кислоты ВАЧЛ.

Описанный анализ ОТ-ПЦР для ВАЧЛ был разработан на основе последовательностей из широкого спектра циркулирующих в настоящее время полевых штаммов ВАЧЛ. Он также включает запатентованный синтетический анализ внешнего контроля для проверки правильности функционирования компонентов анализа.

Наборы для одностадийной ПЦР в режиме реального времени доступны в продаже. Ниже приведено несколько основных этапов, которые могут быть изменены в зависимости от местных/конкретных требований, используемых наборов и доступного оборудования.

Праймер и последовательности образцов для обнаружения вирусов вида ВАЧЛ:

2.2.1. Растворы смеси праймера и образца готовятся в концентрации 25 × при 5 мкМ для прямого и обратного праймеров и 3 мкМ для образца. План тестового планшета должен быть спроектирован и загружен в программное обеспечение машины ПЦР в реальном времени. Используя макет в качестве руководства, в соответствующие лунки планшета, согласно плану, добавляют 5 мкл образцов РНК, включая образцы, подлежащие испытанию, положительные и отрицательные образцы.

2.2.2. РНК денатурируют нагреванием при 95 ° С в течение 5 минут с последующим быстрым охлаждением на льду в течение, по меньшей мере, 3 минут.

2.2.3. Подготавливают в соответствии с инструкциями производителя соответствующий объем основной смеси для ОТ-ПЦР в режиме реального времени в один этап, для количества образцов, подлежащих тестированию. В основную смесь включают 1 мкл 25 × раствора смеси праймера и образца (из пункта 2.2.1), чтобы получить в каждой лунке конечную концентрацию 200 нМ для каждого праймера и 120 нМ для образца. Распределяют 20 мкл основной смеси в каждую лунку планшета ПЦР, содержащую денатурированную РНК.

2.2.4. Помещают планшет в термоциклер в режиме реального времени, запрограммированный для обратной транскрипции, и для обнаружения ДНК путем флуоресценции/амплификации, в соответствии с рекомендациями производителей. Условия амплификации состоят, например, из первой стадии обратной транскрипции при 48 °C в течение 10 минут, затем 10 минут при 95 ° C и 40 циклов по 15 секунд при 95 ° C и 45 секунд при 60°C.

2.2.5. Образцы считаются положительными, если нормализованная флуоресценция для теста ОТ-ПЦР относительно ВАЧЛ превышает пороговое значение 0,1 в течение 36 циклов ПЦР во всех репликациях образца.

Образцы считаются неубедительными, если нормализованная флуоресценция для теста ОТ-ПЦР относительно ВАЧЛ превышает пороговое значение 0,1 между 36 и 40 циклами ПЦР в любой репликации образца.

Образцы считаются отрицательными, если нормализованная флуоресценция для теста ОТ-ПЦР относительно ВАЧЛ не превышает пороговое значение 0,1 в течение 40 циклов ПЦР во всех репликациях образца, и если нормализованная флуоресценция для запатентованного синтетического теста внешнего контроля превышает пороговое значение 0,1 в течение 33 циклов ПЦР.

Приложение № 3

к Ветеринарно-санитарной

норме, устанавливающей

условия относительно здоровья при

передвижении и импорте лошадиных

Model

Certificat sanitar-veterinar