Постановление № 414 от 02.07.2025

ПРАВИТЕЛЬСТВО РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА

ПОСТАНОВЛЕНИЕ

об утверждении Положения об установлении эталонных

методов анализа спиртосодержащих напитков

№ 414  от  02.07.2025

 (в силу 10.09.2028) 

Мониторул Офичиал ал Р. Молдова № 474-477 ст. 582 от 10.09.2025

* * *

На основании части (2) статьи 177 Закона № 1100/2000 о производстве и обороте этилового спирта и алкогольной продукции (Официальный монитор Республики Молдова, 2023 г., № 126, ст.197), с последующими изменениями, Правительство

ПОСТАНОВЛЯЕТ:

1. Утвердить Положение об установлении эталонных методов анализа спиртосодержащих напитков (прилагается).

2. Контроль за выполнением настоящего постановления возложить на Национальное агентство по безопасности пищевых продуктов.

3. Настоящее постановление вступает в силу через 36 месяцев с даты опубликования в Официальном мониторе Республики Молдова.

Утверждено

Постановлением Правительства

№ 414/2025

ПОЛОЖЕНИЕ

об установлении эталонных методов анализа

спиртосодержащих напитков

Положение об установлении эталонных методов анализа спиртосодержащих напитков (в дальнейшем – Положение), перелагает Регламент Комиссии (UЕ) № 2870/2000 от 19 декабря 2000 года, устанавливающий эталонные методы анализа спиртосодержащих напитков, CELEX: 32000R2870), опубликованный в Официальном журнале Европейского Союза L 333 от 29 декабря 2000 года, с последними изменениями, внесенными Имплементационным регламентом (UЕ) 2023/383 Комиссии от 16 февраля 2023 года

Глава I

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Эталонные методы анализа спиртосодержащих напитков и этилового спирта сельскохозяйственного происхождения, указанные в приложении, обеспечивают соблюдение Положения об определении, описании, представлении и этикетировании спиртосодержащих напитков, утвержденного Постановлением Правительства № 589/2023:

1.1. в случае официального контроля;

1.2. в случае возникновения спора.

2. В целях настоящего Положения используются следующие понятия:

2.1. предел повторяемости – значение, меньшее или равное абсолютной разнице между двумя результатами испытаний, полученными в условиях повторяемости (один и тот же оператор, одно и то же оборудование, одна и та же лаборатория и короткий интервал времени), оцениваемое с вероятностью 95% (SM ISO 3534-1);

2.2. предел воспроизводимости – значение, меньшее или равное абсолютной разнице между двумя результатами испытаний, полученными в условиях воспроизводимости (разные операторы, разное оборудование, разные лаборатории), оцениваемое с вероятностью 95% (SM ISO 3534-1);

2.3. точность – степень соответствия между результатом испытания и принятым эталонным значением (SM ISO 3534-1).

Глава II

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

3. Настоящее Положение применяется к этиловому спирту сельскохозяйственного происхождения и спиртосодержащим напиткам, как они определены в статье 1 Закона № 1100/2000 о производстве и обороте этилового спирта и алкогольных напитков и в приложении № 2 к Положению об определении, описании, представлении и этикетировании спиртосодержащих напитков, утвержденному Постановлением Правительства № 589/2023.

4. Для целей настоящего Положения, этиловый спирт сельскохозяйственного происхождения рассматривается как дистиллят, для которого алкогольная крепость в объеме должна измеряться непосредственно в соответствии с разделом 2 главы I приложения. Если же проба алкоголя не прозрачна или в ней видны взвешенные частицы, пробу перегоняют.

5. Для определения летучих веществ в этиловом спирте сельскохозяйственного происхождения необходима калибровка по стандартному раствору С, приготовленному в абсолютном этаноле, чтобы получить подходящее матричное соответствие между пробами и стандартными растворами, описанными в разделе 2 главы III приложения.

6. Для определения фурфурола в этиловом спирте сельскохозяйственного происхождения, в соответствии с деталями, приведенными в главе IX приложения, этиловый спирт сельскохозяйственного происхождения уменьшают вдвое путем добавления воды таким образом, чтобы удвоить его первоначальный объем и достичь алкогольной крепости в объеме, совместимой с калибровочными растворами. Результаты анализа фурфурола переводятся в граммы на гектолитр 100% спирта в объеме в соответствии с уравнением:

"Концентрация фурфурола в граммах на гектолитр спирта при 100% об. =
Концентрация фурфурола в мг/л × 10/объемная алкогольная крепость (% об.)",

где алкогольная крепость в объеме (% об.) – крепость алкоголя в анализируемой пробе, определенная в главе I приложения.

7. Для определения содержания радиоуглерода в этаноле и этиловом спирте сельскохозяйственного происхождения используется метод, изложенный в главе X приложения.

8. Без ущерба для подпункта 1.1 допускается использование других аналитических методов под ответственность руководителя лаборатории при условии, что точность и прецизионность (повторяемость и воспроизводимость) этих методов по меньшей мере эквивалентны точности и прецизионности эталонных аналитических методов, предусмотренных в приложении.

9. В случае если эталонные аналитические методы обнаружения и количественного определения веществ, содержащихся в спиртосодержащих напитках, не установлены, используются следующие методы:

9.1. аналитические методы, одобренные для процедур, признанных на международном уровне или в Европейском Союзе, и отвечающие, в частности, критериям, изложенным в приложении № 2 к Закону № 82/2024 об официальном контроле в агропродовольственной сфере;

9.2. аналитические методы, соответствующие рекомендуемым стандартам Международной организации по стандартизации (в дальнейшем – ISO) или принятым в качестве национальных стандартов;

9.3. аналитические методы, признанные Генеральной ассамблеей Международной организации по виноградарству и виноделию (в дальнейшем – OIV) и опубликованные OIV;

9.4. в отсутствии метода, указанного в п.9.1, 9.2 и 9.3, по причинам точности, повторяемости и воспроизводимости:

9.4.1. аналитический метод, утвержденный государством-членом Европейского союза;

9.4.2. там где применимо – любой другой подходящий аналитический метод.

Приложение

к Положению об установлении эталонных методов

анализа спиртосодержащих напитков

ЭТАЛОННЫЕ МЕТОДЫ

анализа спиртосодержащих напитков и этилового спирта

сельскохозяйственного происхождения

Глава I

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ АЛКОГОЛЯ В ОБЪЕМЕ

Эталонный метод включает в себя два раздела:

Раздел 1. Приготовление дистиллята

Раздел 2. Измерение плотности дистиллята

1. Область применения

Метод используется для определения фактической алкогольной крепости в объеме спиртосодержащих напитков.

2. Нормативные ссылки

SM SR EN ISO 3696:2006 – Вода, используемая в аналитических лабораториях. Технические условия и методы анализа.

3. Термины и определения

3.1. эталонная температура – стандартная температура 20 °C, при которой определяют алкогольную крепость в объеме, плотность и удельный вес спиртосодержащих напитков. Термин "при t °C" используется для всех определений (плотности или концентрации алкоголя в объеме), выраженных при температуре, отличной от эталонной температуры 20 °C;

3.2. плотность – масса на единицу объема in vacuo спиртосодержащих напитков при 20 °C. Выражается в килограммах на кубический метр и обозначается ρ_{20 °C} или ρ₂₀.

3.3. удельный вес – выраженное десятичным числом отношение плотности спиртосодержащего напитка при температуре 20 °C к плотности воды при той же температуре. Имеет символ d_{20 °C/20 °C} или d_20/20, или только d, для того чтобы не вводить в заблуждение. Измеренная характеристика должна быть указана в сертификате испытаний с использованием только вышеуказанных символов.

Удельный вес можно определить по плотности ρ₂₀ при 20 °C.

или

где:

998,203 – плотность воды при 20 °C.

3.4. реальная алкогольная крепость в объеме – реальная крепость алкоголя в объеме в спиртосодержащих напитках равна количеству литров этилового спирта, содержащегося в 100 литрах водно-спиртового раствора с той же плотностью, что и спирт или спиртосодержащий напиток после дистилляции. Эталонные значения алкогольной крепости в объеме (% об.) при 20 °C по отношению к плотности при 20 °C для различных используемых водно-спиртовых растворов приведены в международной таблице, принятой Международной организацией законодательной метрологии в Рекомендации № 22.

Общее уравнение, которое устанавливает связь между алкогольной крепостью в объеме с плотностью водно-спиртового раствора при определенной температуре, приведено в руководстве по методам анализа OIV.

3.4.1. Для ликеров и кремовых ликеров, у которых достаточно сложно точно измерить объем, пробу необходимо взвесить, а алкогольную крепость сначала рассчитать в зависимости от массы.

Формула преобразования:

где:

ТАМ = концентрация алкоголя в массе,

р₂₀ (алкоголь) = 789,24 кг/м³.

4. Принцип

После перегонки алкогольную крепость в объеме дистиллята определяют с помощью пикнометрии, электронной денсиметрии или денсиметрии с использованием гидростатического взвешивания.

Раздел 1

Приготовление дистиллята

1. Область

Метод подходит для приготовления дистиллятов, используемых для определения концентрации алкоголя в объеме спиртосодержащих напитков.

2. Принцип

Спиртосодержащие напитки подвергаются дистилляции с целью отделения этилового спирта от других летучих экстрактивных веществ (вещества, которые не дистиллируются).

3. Реактивы и материалы:

3.1. гранулы против брызг;

3.2. концентрированная эмульсия против пенообразования (для кремовых ликеров).

4. Приборы и оборудование

Стандартное лабораторное оборудование и, в частности, следующее:

4.1. водяная баня, поддерживающая температуру от 10 °C до 15 °C. Водяная баня, поддерживающая температуру 20 °C (± 0,2 °C);

4.2. волюметрические колбы класса А, 100 мл и 200 мл, сертифицированнные на 0,1% и 0,15% соответственно;

4.3. аппарат для дистилляции:

4.3.1. должен отвечать следующим требованиям:

4.3.1.1. количество соединений не должно превышать минимального количества, строго необходимого для обеспечения герметичности системы;

4.3.1.2. включать устройство для предотвращения заливки (попадания жидкости в пар при кипении) и для нормализации скорости перегонки паров, содержащих спирт;

4.3.1.3. быстрая и полная конденсация паров спирта;

4.3.1.4. сбор первых фракций перегонки в водной среде.

Для предотвращения любой пирогенной реакции с экстрактивным
веществом источник тепла должен использоваться с подходящим рассеивателем тепла;

4.3.2. на рисунке 1 показан подходящий аппарат для дистилляции, состоящий из следующих частей:

4.3.2.1. круглодонная колба объемом 1 л с матовым стеклом;

4.3.2.2. колонка для ректификации высотой не менее 20 см (например, колонка типа "Vigreux");

4.3.2.3. угловой разъем с конденсатором, зафиксированным вертикально, с прямым краем 10 см (конденсатор типа West);

4.3.2.4. охлаждающая спираль длиной 40 см;

4.3.2.5. трубка для экстракции, которая переносит дистиллят на дно градуированной колбы, содержащей небольшое количество воды.

Описанный выше прибор подходит для минимальной пробы объемом 200 мл. Однако меньшую пробу (100 мл) можно перегнать с помощью меньшей перегонной колбы, если она оснащена пузырьковой насадкой или другим приспособлением для предотвращения загрязнения.

Рисунок 1. Перегонный аппарат для измерения фактической концентрации

алкоголя в объеме спиртосодержащих напитков

1. стеклянная круглодонная колба объемом 1 литр со стандартным сферическим швом из шлифованного стекла;

2. трубка для ректификации 20 см типа "Vigreux";

3. конденсатор West с прямым краем 10 см;

4. охлаждающая спираль 40 см;

5. Хранение проб для испытаний

До проведения анализа пробы хранятся при комнатной температуре.

6. Порядок работы

Предварительные замечания: дистилляция может быть проведена в соответствии с процедурой, опубликованной Международным союзом теоретической и прикладной химии (International Union of Pure and Applied Chemistry) IUPAC (1968).

6.1.Проверка аппарата для дистилляции

Используемый аппарат должен быть способен выполнять следующие задачи:

перегонка 200 мл водно-спиртового раствора с известной концентрацией около 50 % об. не должна приводить к потере алкоголя более чем 0,1 % об.

6.2. Спиртосодержащие напитки с концентрацией алкоголя менее 50% об.

Отмеряют 200 мл спиртосодержащего напитка в объемную колбу. Записывают температуру данной жидкости или поддерживают стандартную температуру (20 °C). Пробу переливают в круглодонную колбу для перегонного аппарата и объемная колба разбавляется тремя порциями, каждая примерно по 20 мл дистиллированной воды. Добавляют каждую порцию очищающей воды к содержимому перегонной колбы.

Разбавления в 60 мл достаточно для спиртосодержащих напитков, содержащих менее 250 г сухого экстракта на литр. В противном случае, для предотвращения пиролиза, объем очищающей воды должен составлять не менее 70 мл, если концентрация сухого экстракта составляет 300 г/л, 85 мл – при концентрации сухого экстракта 400 г/л и 100 мл – при концентрации сухого экстракта 500 г/л (некоторые ликеры или фруктовые кремы). Эти объемы пропорционально соотносятся с различными объемами проб.

Добавляется несколько гранул против вспенивания (3.1) (и эмульсия против вспенивания в случае с кремовыми ликерами).

Наливается 20 мл дистиллированной воды в оригинальную волюметрическую колбу объемом 200 мл, которая будет использоваться для хранения дистиллята. Затем колбу помещают в холодную водяную баню (4.1) (от 10 до 15 °C – для спиртосодержащих напитков с анисовым вкусом).

Дистиллируют, избегая вытекания и карбонизации, периодически встряхивают содержимое колбы, пока уровень дистиллята не станет на несколько миллиметров ниже калибровочной метки объемной колбы.

Если температура дистиллята понизилась до ± 0,5 °C от температуры исходной жидкости, доливают дистиллированную воду до метки и тщательно перемешивается.

Дистиллят используют для определения алкогольной крепости в объеме (раздел 2).

6.3. Спиртосодержащие напитки с концентрацией алкоголя более 50 % об.

Отмеряется 100 мл спирта в объемную колбу на 100 мл и переливается в круглодонную колбу в перегонном аппарате.

Объемную колбу ополаскивают несколько раз дистиллированной водой и эта вода добавляется к содержимому круглодонной перегонной колбы. Доливают необходимое количество воды, чтобы содержимое колбы составило около 230 мл.

Наливают 20 мл дистиллированной воды в колбу объемом 200 мл, которая будет использоваться для хранения дистиллята. Колбу помещают в холодную водяную баню (4.1) (от 10 до 15 °C – для спиртов с анисовым вкусом).

Дистиллируют, с периодическим встряхиванием содержимого колбы, до тех пор, пока уровень дистиллята не станет на несколько миллиметров ниже калибровочной метки волюметрической колбы в 200 мл.

Если температура дистиллята понизилась до ± 0,5 °C от температуры исходной жидкости, доливают дистиллированную воду до метки и тщательно перемешивают.

Дистиллят используют для определения крепости спирта в объеме (раздел 2).

Алкогольную крепость в объеме в два раза превышает концентрацию алкоголя в дистилляте.

Раздел 2

Измерение плотности дистиллята

Метод А. Определение реальной концентрации алкоголя в объеме спиртосодержащих напитков – измерение методом пикнометрии

1. Принцип

Алкогольная крепость в объеме определяется по плотности дистиллята, измеренной методом пикнометрии.

2. Реактивы и материалы

На протяжении анализа, если не указано иное, должны использоваться только признанные аналитические реагенты и вода не ниже 3 класса, как определено в SM SR EN ISO 3696:2006.

2.1. Раствор хлорида натрия (2 % m/v)

Для приготовления 1 л взвешивают 20 г хлорида натрия и растворяют в 1 л воды.

3. Приборы и оборудование

Обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее:

3.1. аналитические весы, позволяющие взвешивать 0,1 мг;

3.2. термометр с ртутным стержнем из матового стекла, откалиброванный до десятых долей градуса от 10 до 30 °C. Этот термометр должен быть сертифицирован или проверен с использованием сертифицированного термометра;

3.3. пикнометр из стекла пирекс объемом около 100 мл, оснащенный съемным термометром из матового стекла (3.2). Пикнометр имеет боковую трубку длиной 25 мм и внутренним диаметром (максимум) 1 мм, с косым скошенным концом. При необходимости можно использовать другие пикнометры, описанные в SM ISO 3507, например, объемом 50 мл;

3.4. сосуд, используемый в качестве тары, с тем же наружным объемом (не более 1 мл), что и пикнометр, и массой, равной массе пикнометра, заполненный жидкостью плотностью 1,01 (раствор хлорида натрия 2,1);

3.5. Теплоизоляционный материал, который плотно прилегает к корпусу пикнометра.

Метод определения плотности алкогольных напитков под вакуумом требует использования весов с двумя пикнометрами, пикнометра и сосуда, используемого в качестве тары, с одинаковым наружным объемом, чтобы исключить влияние движения воздуха в любой момент времени. Эта простая методика может быть применена с использованием одних кастрюльных весов, при условии, что стакан, используемый в качестве тары, будет взвешиваться повторно, чтобы отслеживать изменения эффекта плавучести воздуха во времени.

4. Порядок работы

Предварительные замечания:

Ниже описана процедура использования пикнометра объемом 100 мл для определения концентрации алкоголя, которая дает наиболее точные результаты. Однако можно использовать и пикнометр меньшего объема, например, 50 мл.

4.1. Калибровка пикнометра

Калибровка пикнометра осуществляется путем определения следующих параметров:

- тара пустого пикнометра;

- объем пикнометра при 20 °C;

- масса пикнометра, заполненного водой при 20 °C.

4.1.1. Калибровка с помощью весов с одной чашей:

Определяют:

- массу чистого и сухого пикнометра (P);

- массу пикнометра, заполненного водой при t °C (P1);

- массу сосуда, используемого в качестве тары (T0);

4.1.1.1. взвешивают чистый и сухой пикнометр (P);

4.1.1.2. осторожно заполняют пикнометр дистиллированной водой комнатной температуры и прикрепляется термометр;

пикнометр осторожно вытирают насухо и устанавливают в теплоизоляционный материал;

контейнер встряхивают, переворачивая до тех пор, пока термометр не покажет постоянную температуру;

пикнометр помещают так, чтобы он соприкасался с верхним краем боковой трубки;

считывают температуру t °C и, при необходимости, исправляют возможные неточности в градации температуры.

Взвешивают пикнометр, заполненный водой (P1);

4.1.1.3. взвешивают сосуд, используемый в качестве тары (T0);

4.1.1.4. подсчеты

4.1.1.4.1. тара пустого пикнометра = P - m,

где m – масса воздуха в пикнометре.

m = 0,0012 × (P1 - P),

где 0,0012 – плотность сухого воздуха при температуре 20 °C и давлении 760 мм рт. ст.

4.1.1.4.1. Объем пикнометра при 20 °C:

где,

F_t – фактор для температуры при t °C из приложения к Эталонным методам анализа спиртосодержащих напитков и этилового спирта сельскохозяйственного происхождения;

V₂₀ °C должно быть как можно ближе к 0,001 мл.

4.1.1.4.1. Масса воды в пикнометре при 20 °C:

где:

0,998203 – плотность воды при 20 °C.

При необходимости можно использовать значение плотности воздуха 0,99715, а алкогольную крепость рассчитать на основе эквивалентной плотности по таблицам Accize și Vame HM для воздуха.

4.1.2. Метод калибровки с помощью весов с двумя чашами:

4.1.2.1. помещают сосуд, используемый в качестве тары, на левую чашу весов, а чистый и сухой пикнометр с коллекторным упором – на правую чашу весов. Уравновесьте две чаши, поместив гири на ту, где находится пикнометр: p грамм.

4.1.2.2. пикнометр осторожно заполняют дистиллированной водой комнатной температуры и прикрепляют термометр;

4.1.2.3. пикнометр тщательно вытирают насухо и помещают в теплоизоляционный материал.

Взбалтывают, переворачивая емкость до тех пор, пока термометр не покажет постоянную температуру.

Устанавливают уровень на верхнем крае боковой тубы. Очищают боковую тубу, устанавливают ограничитель коллектора.

Считывают температуру t °C и, при необходимости, исправляют возможные неточности в градации температуры.

Взвешивают пикнометр, наполненный водой, компенсируя уравновешивание весом p′ в граммах.

4.1.2.4. подсчеты

4.1.2.4.1. тара пустого пикнометра = p + m,

где m – масса воздуха в пикнометре.

m = 0,0012 × (p - p′)

4.1.2.4.2. Объем пикнометра при 20 °C:

где:

F_t – фактор для температуры при t °C из приложения к Эталонным методам анализа спиртосодержащих напитков и этилового спирта сельскохозяйственного происхождения.

V20_°C должно быть как можно ближе к 0,001 мл.

4.1.2.4.3. Масса воды в пикнометре при 20 °C:

где:

0,998203 – плотность воды при 20 °C.

4.2. Определение концентрации алкоголя в исследуемой пробе

4.2.1. Использование одночашечных весов:

4.2.1.1. взвешивают стекло, используемое в качестве тары, вес T1;

4.2.1.2. взвешивают пикнометр с подготовленным дистиллятом, P2 – вес при t °C.

4.2.1.3. Подсчеты

4.2.1.3.1. dT = Т1 – Е0

4.2.1.3.2. Масса пустого пикнометра в момент измерения = P – m + dT

4.2.1.3.3. Масса жидкости в пикнометре при t °C = P2 – (P - m + dT)

4.2.1.3.4. Плотность при t °C в г/мл

4.2.1.3.5.

4.2.1.3.6. плотность при t °C выражается в килограммах на m³ путем умножения ρ_{t °C} на 1 000, полученное значение известно как ρ_t.

4.2.1.3.7. рt_t корректируется _ρt до 20, используя таблицу плотностей ρ_T для водно-спиртовых смесей Сборника международных методов анализа и оценки вин и сусел OIV;

в таблице находят строку, соответствующая температуре T в градусах, без десятичных знаков, непосредственно под t °C, наименьшей плотности выше ρ_t. Используют разницу в таблице, найденную под этой плотностью, вычисляют плотность ρ_t спирта при температуре T, в градусах без десятичных знаков;

4.2.1.3.8. используя температурную линию без десятичных знаков, вычисляют разность между плотностью ρ′ в таблице, расположенной непосредственно над ρ_t, и рассчитанной плотностью ρ_t. Эта разница делится на разницу в таблице, которая находится справа от плотности ρ′;

коэффициент указывает на десятичную часть алкогольной крепости, а вся алкогольная крепость находится в верхней части столбца, где расположена плотность ρ′ (Dt, алкогольная крепость).

В качестве альтернативы пикнометр помещают в водяную баню с температурой 20 °C (± 0,2 °C) и заполняют его до отметки;

4.2.1.4. результат

Используя плотность ρ₂₀, рассчитывается фактическая алкогольная крепость по таблицам крепости алкоголя, приведенным ниже:

таблица, указывающая алкогольную крепость в объеме (% об.) при 20 °C в зависимости от плотности при 20 °C водно-спиртовых растворов, является международной таблицей, принятой Международной организацией законодательной метрологии в Рекомендации № 22;

4.2.2. Метод с использованием весов с одной чашей:

4.2.2.1. взвешивают пикнометр с подготовленным дистиллятом (см. часть I), где ρ″ – масса при t °C.

4.2.2.2. Расчет

4.2.2.2.1. Масса жидкости в пикнометре при t °C = ρ + m - ρ″;

4.2.2.2.2. Плотность при t °C в г/мл

4.2.2.2.3. выразить плотность при t °C в килограммах на м³ и выполнить корректировку температуры для расчета алкогольной крепости при 20 °C, как указано выше для использования весов с одной кастрюлей.

5. Характеристики эффективности метода (точность)

5.1. Статистические результаты межлабораторных исследований

Приведенные ниже данные были получены в ходе международного исследования эффективности метода, проведенного с использованием признанных международных процедур [1] [2].

Метод B. Определение фактической алкогольной крепости в объеме спиртосодержащих напитков – измерение методом электронной денситометрии (на основе резонансной частоты колебаний пробы в колебательной ячейке)

1. Принцип

Плотность жидкости определяют электронными измерениями колебаний вибрационной трубки в форме буквы U. Для проведения данных измерений проба помещают в систему колебаний, частота колебаний которой изменяется под действием добавленной массы.

2. Реактивы и материалы

Во время анализа, если не указано иное, используют только реагенты с признанной аналитической чистотой и вода не ниже 3 класса, согласно определению в SM SR EN ISO 3696:2006:

2.1. ацетон (CAS 666-52-4) или абсолютный спирт;

2.2. сухой воздух.

3. Аппаратура и оборудование

Обычные лабораторные приборы и, в частности, следующие приборы:

3.1. Денситометр с цифровым дисплеем

Электронный денситометр для проведения этих измерений должен быть способен выражать плотность в г/мл с точностью до 5 десятичных знаков.

Денситометр должен быть установлен на абсолютно устойчивой поверхности, огражденной от вибраций.

3.2. Регулировка температуры

Рабочие характеристики денситометра действительны только в том случае, если измерительная ячейка подключена к встроенному регулятору температуры, который может обеспечить стабильность температуры с точностью ± 0,02 °C или менее.

Точное установление и контроль температуры в измерительной ячейке очень важны, поскольку погрешность в 0,1 °C может привести к изменению плотности на 0,1 кг/куб.м.

3.3. Шприцы для введения пробы или устройство для автоматического отбора проб.

4. Порядок работы

4.1. Калибровка денситометра

При первом вводе в эксплуатацию прибор калибруют в соответствии с инструкциями его производителя. Калибровка должна производиться регулярно и проверяться на основе сертифицированного эталонного стандарта или внутреннего эталонного раствора лаборатории, основанного на сертифицированном эталонном стандарте.

4.2. Определение плотности пробы

4.2.1. при необходимости перед измерением ячейку очищают и просушивают ацетоном или абсолютным спиртом и сухим воздухом. Ячейку промывают пробой для испытаний;

4.2.2. пробу вводят в ячейку (с помощью шприца или устройства для автоматического отбора проб) до полного заполнения ячейки. Во время заполнения проверяют, чтобы не осталось пузырьков воздуха. Проба должна быть однородной и не содержать твердых частиц. Частицы материала в взвешенном состоянии удаляют фильтрацией перед проведением анализа;

4.2.3. после стабилизации индикатора записывают плотность ρ₂₀ или алкогольную крепость, отображенную на денситометре.

4.3. Результат

Если используется плотность ρ₂₀, фактическую алкогольную крепость рассчитывают с помощью приведенных ниже таблиц концентрации спирта.

Таблица, содержащая значение концентрации спирта в объеме (% об.) при 20 °C в зависимости от плотности при 20 °C смесей воды и спирта, является таблицей, принятой Международной организацией по метрологии в Рекомендации № 22.

5. Характеристики эффективности метода (точность)

5.1. Статистические результаты межлабораторного исследования

В ходе международного исследования эффективности метода, проведенного с использованием процедур, признанных на международном уровне, были получены следующие данные [1] [2].

Метод C. Определение фактической концентрации спирта в объеме спиртосодержащих напитков – измерение с помощью денситометра с использованием гидростатических весов

1. Принцип

Алкогольную крепость спиртосодержащих напитков можно измерить с помощью денситометрии с использованием гидростатических весов, основанных на принципе Архимеда, согласно которому тело, погруженное
в жидкость, выталкивается на поверхность количеством жидкости, равным весу вытесненной жидкости.

2. Реактивы и материалы

При проведении анализа, если не указано иное, используются только реагенты с признанной аналитической чистотой и вода не ниже 3 класса, согласно определению в SM SR EN ISO 3696:2006.

2.1. Раствор для очистки флотатора (гидроксид натрия, 30% m/v)

Для приготовления 100 мл взвешивают 30 г гидроксида натрия и доливают этанолом 96 % об.

3. Приборы и оборудование

Обычные лабораторные приборы, в частности:

3.1. гидростатические весы с одной чашей и чувствительностью 1 мг;

3.2. флотатор объемом не менее 20 мл, специально приспособленный для весов, подвешенный на нити диаметром не более 0,1 мм;

3.3. градуированный цилиндр с отметкой уровня. Флотатор должен полностью помещаться в объем цилиндра, расположенного под отметкой; поверхность жидкости может проникать только через поддерживающую нить. Градуированный цилиндр должен иметь внутренний диаметр, как минимум на 6 мм больше диаметра флотатора;

3.4. термометр (или датчик температуры) с делениями в градусах и десятиградусных долях от 10 до 40 °C, откалиброванный с точностью до 0,05 °C;

3.5. гири, откалиброванные официальным органом по сертификации.

4. Порядок работы

Флотатор и градуированный цилиндр после каждого измерения должны очищаться дистиллированной водой, высушиваться мягкой лабораторной бумагой, не оставляющей ворса, и промываться раствором, плотность которого предстоит определить. Измерения производят в момент, когда прибор находится в стабильном состоянии, чтобы ограничить потери алкоголя в результате испарения.

4.1. Калибровка весов

Хотя весы обычно имеют внутреннюю систему калибровки, должна быть возможность калибровки гидростатических весов с помощью гирь, проверенных официальным органом по сертификации.

4.2. Калибровка флотатора

4.2.1. градуированный цилиндр заполняется до отметки дважды дистиллированной водой (или водой эквивалентной чистоты, т.е. микрофильтрованной водой с проводимостью 18,2 ΜΩ/см) при температуре от 15 °C до 25 °C, предпочтительно 20 °C;

4.2.2. погружают флотатор и термометр, перемешивают, снимают показания плотности жидкости в приборе и, при необходимости, корректируют показания так, чтобы они соответствовали показаниям для воды при температуре измерения.

4.3. контролируют с помощью водно-спиртового раствора:

4.3.1. градуированный цилиндр заполняется до отметки водно-спиртовым раствором известной концентрации при температуре от 15 до 25 °C, предпочтительно 20 °C;

4.3.2. погружают флотатор и термометр, перемешивают, снимают показания плотности жидкости (или алкогольной крепости, если возможно) с прибора. Алкогольная крепость, установленная таким образом, должна быть равна алкогольной крепости, определенной ранее;

Этот раствор с определенной концентрацией алкоголя можно использовать и для калибровки флотатора вместо дважды дистиллированной воды.

4.4. Измерение плотности дистиллята (или концентрации спирта, если прибор позволяет это сделать)

4.4.1. наливают пробу в градуированный цилиндр до отметки.

4.4.2. погружают флотатор и термометр, перемешивают, снимают показания плотности жидкости (или алкогольной крепости, если возможно) с прибора. Записывают температуру, если плотность измеряется при t °C (ρ_t).

4.4.3. корректируют ρ_t до 20, используя таблицу плотностей ρΤ для водно-спиртового раствора из Сборника международных методов анализа и оценки вин и сусел OIV.

4.5. Очистка флотатора и градуированного цилиндра

4.5.1. погружают флотатор в раствор для очистки флотатора в градуированный цилиндр;

4.5.2. оставляют на час для впитывания, периодически поворачивая флотатор;

4.5.3. промывают большим количеством водопроводной воды, а затем дистиллированной водой;

4.5.4. просушивают мягкой лабораторной бумагой, не оставляющей ворса.

Эту процедуру проводят после первого использования флотатора, а затем по мере необходимости.

4.6. Результат:

С помощью плотности ρ₂₀ рассчитывают действительную алкогольную крепость с помощью приведенных ниже таблиц, указывающих концентрацию алкоголя.

Таблица, содержащая значение концентрации алкоголя в объеме (% об.) при 20 °C в зависимости от плотности при 20 °C водно-спиртового раствора, принята в Рекомендации № 22 Международной организации по законодательной метрологии.

5. Характеристики эффективности метода (точность)

5.1. Статистические результаты межлабораторных испытаний

В ходе международного исследования эффективности метода, проведенного с использованием процедур, признанных на международном уровне, были получены следующие данные [1] [2].

Глава II

ГРАВИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО СУХОГО

ОСТАТКА В СПИРТОСОДЕРЖАЩИХ НАПИТКАХ

1. Область применения

Этот метод используют для измерения содержания растворенных твердых веществ в спиртосодержащем напитке после удаления спирта и воды путем испарения.

2. Нормативные ссылки

SM SR EN ISO 3696:2006 – Вода, используемая в аналитических лабораториях. Технические условия и методы анализа.

3. Определение

Общий сухой экстракт или общее сухое вещество включает все нелетучие вещества в указанных физических условиях.

4. Принцип

Взвешивание остатка после выпаривания спирта на водяной бане и сушки в сушильном шкафу.

5. Приборы и оборудование

5.1. Цилиндрическая капсула для выпаривания с плоским дном диаметром 35 мм;

5.2. водяная баня;

5.3. пипетка 25 мл, класс А;

5.4. сушильный шкаф;

5.5. десикатор;

5.6. аналитические весы с точностью 0,1 мг.

6. Отбор и пробы

Перед анализом пробы хранят при комнатной температуре.

7. Порядок работы

7.1. с помощью пипетки переносят 25 мл спирта, содержащего менее 15 г/л сухого вещества, в цилиндрическую испарительную чашку с плоским дном диаметром 55 мм. В течение первого часа выпаривания выпарительную пластину помещают на крышку кипящей водяной бани таким образом, чтобы жидкость не кипела, так как это приведет к потерям в результате разбрызгивания. Оставляют еще на один час в прямом контакте с парами кипящей водяной бани;

7.2. завершают сушку, поместив испарительную пластину в сушильный шкаф при температуре 105 °C ± 3 °C на два часа. Дают испарительной пластине остыть в эксикаторе и взвешивают выпарительную пластину и ее содержимое.

8. Подсчеты

Масса остатка, умноженная на 40, равна сухому содержанию в спирте и должна быть выражена в г/л с точностью до одного десятичного знака.

9. Характеристики эффективности метода (точность)

9.1. Статистические результаты межлабораторных испытаний

В ходе международного исследования эффективности метода, проведенного с использованием процедур, признанных на международном уровне, были получены следующие данные [1] [2].

Глава III

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕТУЧИХ ВЕЩЕСТВ И МЕТАНОЛА

В СПИРТОСОДЕРЖАЩИХ НАПИТКАХ

Раздел 1

Общие замечания

1. Определения

Положение об определении, описании, представлении и этикетировании спиртосодержащих напитков, утвержденные Постановлением Правительства № 589/2023, устанавливают минимальное содержание летучих веществ, кроме этанола и метанола, для ряда спиртосодержащих напитков, алкогольных напитков с низким содержанием спирта и слабоалкогольных напитков. Только для данных продуктов эти уровни условно считаются эквивалентными сумме концентраций:

1.1. летучих кислот, выраженных как уксусная кислота;

1.2. альдегидов, выраженных в виде этанола, как сумма этанола (ацетальдегида) и фракции этанола, содержащейся в 1,1 дитоксиэтане (ацетале);

1.3. следующих высших спиртов: пропан-1-ол, бутан-1-ол, бутан-2-ол, 2-метилпропан-1-ол, оцениваемые как отдельный спирт, и 2-метилбутан-1-ол и 3-метилбутан-1-ол, оцениваемые как отдельный спирт или как сумма обоих;

1.4. этилацетат.

Для измерения летучих соединений используют следующие общепринятые методы:

1.4.1. летучие кислоты по летучей кислотности;

1.4.2. альдегиды (этанол и ацеталь), этилацетат и спирты с помощью газовой хроматографии (ГХ).

2. Анализ летучих соединений с помощью газовой хроматографии

Оценка летучих соединений, кроме упомянутых выше, с помощью газовой хроматографии может оказаться чрезвычайно интересной как средство определения происхождения сырья, используемого в дистилляции, и условий эффективной дистилляции.

Некоторые спирты содержат другие летучие компоненты, такие как ароматические соединения, которые являются характерными для сырья, используемого для получения спирта, аромата спиртосодержащего напитка и особых характеристик приготовления спирта. Эти соединения важны для оценки требований, установленных в Положении об определении, описании, представлении и этикетировании спиртосодержащих напитков, утвержденном Постановлением Правительства № 589/2023.

Раздел 2

Определение летучих соединений при помощи газовой хроматографии:

альдегиды, высшие спирты, этилацетат и метанол

1. Область

Этот метод подходит для определения 1,1-диоксиэтана (ацетала), 2-метилбутана-1-ол (активного амилового спирта), 3-метилбутана-1-ол (изоамилового спирта), метанола (метилового спирта), этилэтаноата (этилацетата), бутана-1-ол (н-бутанол), бутана-2 (сек-бутанол), 2-метилпропана-1 (изобутиловый спирт), пропана-1 (н-пропанола) и этанола (ацетальдегид) в спиртосодержащих напитках с помощью газовой хроматографии. Метод использует внутренний стандарт, например пентанон-3. Концентрации аналитов выражаются в граммах на 100 литров абсолютного спирта. Крепость алкогольного продукта должна быть определена перед анализом. Спиртосодержащие напитки, которые могут быть проанализированы с помощью этого метода, включают whisky, brandy, ром, водка (ракиу) из винограда, водка (ракиу) плодовая и водка (ракиу) из виноградной выжимки.

2. Нормативные ссылки

SM SR EN ISO 3696:2006 – Вода, используемая в аналитических лабораториях. Технические условия и методы анализа.

3. Определение

Конгенеры – это летучие вещества, образующиеся одновременно с этанолом в процессе ферментации, дистилляции и созревания спиртосодержащих напитков.

4. Принцип

Конгенеры в спиртосодержащих напитках определяют путем непосредственного введения спиртосодержащего напитка или соответствующим образом разбавленного спиртосодержащего напитка в систему газовой хроматографии (ГХ). Перед введением в спиртосодержащий напиток добавляют соответствующий внутренний стандарт. Конгенеры отделяют путем настройки температуры в соответствующей колонке и обнаруживают с помощью пламенно-ионизационного детектора (FID). Концентрация каждого конгенера определяют с учетом внутреннего стандарта факторов отклика, полученных при калибровке в тех же хроматографических условиях, что и для анализа спиртосодержащих напитков.

5. Реактивы и материалы

Если нет других указаний, следует использовать только реагенты чистотой более 97 %, приобретенные у аккредитованного ISO поставщика с сертификатом чистоты, не содержащие конгенеры, родственные исследуемому веществу, при разбавлении (это может быть подтверждено путем введения отдельных стандартов конгенеров при разбавлении для испытания с использованием условий эксплуатации газового хроматографа, указанных в подпункте 6.4, и только воду не менее 3 градусов в соответствии с определением в SM SR EN ISO 3696:2006. Ацеталь и ацетальдегид хранят в темноте при температуре <5 °C, все остальные реагенты можно хранить при комнатной температуре.

5.1. абсолютный этанол (CAS 64-17-5);

5.2. метанол (CAS 67-56-1);

5.3. пропан-1 (CAS 71-23-8);

5.4. 2-метилпропан-1 (CAS 78-83-1);

5.5. приемлемые внутренние стандарты: пентан-3-ол (CAS 584-02-1), пентан-1-ол (CAS 71-41-0), 4-метилпентан-1-ол (CAS 626-89-1) или метилбутаноат (CAS 1731-84-6);

5.6. 2-метилбутан-1-ол (CAS 137-32-6);

5.7. 3-метилбутан-1-ол (CAS 123-51-3);

5.8. ацетат этила (CAS 141-78-6);

5.9. бутан-1-ол (CAS 71-36-3);

5.10. бутан-2-ол (CAS 78-92-2);

5.11. ацетальдегид (CAS 75-07-0);

5.12. ацеталь (CAS 105-57-7);

5.13. раствор этанола 40 % в/в.

Для приготовления 400 мл/л раствора этанола 400 мл этанола (5.1) наливают в мерную колбу объемом 1 литр, доливают дистиллированной водой и перемешивают.

Только в случае этилового спирта сельскохозяйственного происхождения – абсолютный этанол (CAS 64-17-5).

5.14. приготовление и хранение стандартных растворов (процедура, используемая для валидированного метода).

Все стандартные растворы могут храниться при температуре <5 °C и могут быть каждый месяц свежеприготовленными. Массы компонентов и растворов должны быть зарегистрированы с точностью до 0,1 мг;

5.14.1. cтандартный раствор – A

С помощью пипетки переносят следующие реагенты в мерную колбу объемом 100 мл, содержащую примерно 60 мл раствора этанола (5.13), чтобы свести к минимуму испарение компонента, доливают раствор этанола (5.13) и хорошо перемешивают. Отмечают вес колбы, каждый добавленный компонент и окончательную общую массу содержимого.

Рекомендуется добавлять ацеталь и ацетальдегид в конце, чтобы минимизировать потери при испарении.

Только в случае этилового спирта сельскохозяйственного происхождения стандартный раствор A готовят путем вытягивания пипеткой реагентов с небольшим объемом высших спиртов, чтобы получить стандартные растворы с концентрациями, близкими к предельным значениям для этилового спирта сельскохозяйственного происхождения;

5.14.2. стандартный раствор – B

Пипеткой переносят 3 мл пентан-3-ола или другого соответствующего внутреннего стандарта (5.5) в 100-миллилитровую мерную колбу, содержащую примерно 80 мл раствора этанола (5.13), доводят до объема раствором этанола (5.13) и хорошо перемешивают.

Записывают массу колбы, массу добавленного пентан-3-ола или другого внутреннего стандарта и окончательную общую массу содержимого.

Только в случае этилового спирта сельскохозяйственного происхождения стандартный раствор B готовят путем вытягивания пипеткой соответствующего внутреннего стандарта в небольших объемах с целью получения стандартных растворов с концентрациями, близкими к предельным значениям для этилового спирта сельскохозяйственного происхождения.

5.14.3. стандартный раствор – C

Пипеткой переносят 1 мл раствора A (5.14.1) и 1 мл раствора B (5.14.2) в 100-миллилитровую мерную колбу, содержащую примерно 80 мл раствора этанола (5.13), доводят до объема раствором этанола (5.13) и хорошо перемешивают.

Записывают массу колбы, массу каждого добавленного компонента и конечную общую массу содержимого.

5.14.4. стандартный раствор – D

Для обеспечения аналитической непрерывности готовят контрольный стандарт качества с использованием ранее приготовленного стандарта A (5.14.1). Пипеткой переносят 1 мл раствора A (5.14.1) в 100-миллилитровую мерную колбу, содержащую примерно 80 мл раствора этанола (5.13), доводят до объема раствором этанола (5.13) и хорошо перемешивают.

Записывают вес колбы, каждого добавленного компонента и окончательный общий вес содержимого.

5.14.5. стандартный раствор – E

Пипеткой переносят 1 мл раствора B (5.14.2) в 100-миллилитровую мерную колбу, содержащую примерно 80 мл раствора этанола (5.13), долейте раствором этанола (5.13) и хорошо перемешивают.

Записывают вес колбы, каждого добавленного компонента и конечный общий вес содержимого.

5.14.6. стандартные растворы, используемые для проверки линейности отклика ГЖХ.

В разные мерные колбы объемом 100 мл, содержащие примерно 80 мл раствора этанола (5.13), пипеткой переносят 0 мл, 0,1 мл, 0,5 мл, 1,0 мл, 2,0 мл раствора A (5.14.1) и 1 мл раствора B (5.14.2), доводят до объема раствором этанола (5.13) и хорошо перемешивают.

Записывают массу колбы, каждого добавленного компонента и окончательную общую массу содержимого.

5.14.7. стандартный раствор для контроля качества

Пипеткой переносят 9 мл стандартного раствора D (5.14.4) и 1 мл раствора E (5.14.5) в посуду для взвешивания и хорошо перемешивают.

Записывают массу колбы, каждого добавленного компонента и конечный общий вес содержимого.

6. Приборы и оборудование

6.1. приборы для измерения плотности и концентрации спирта;

6.2. аналитические весы с точностью до четырех знаков после запятой;

6.3. газовый хроматограф с установленной температурой, оснащенный детектором и интегратором ионизации в пламени или другой системой обработки данных, которые могут измерять максимальные плато и пики;

6.4. колонка (колонки) газовой хроматографии, способная разделять аналиты таким образом, чтобы минимальное разрешение между отдельными компонентами (кроме 2-метилбутан-1-ола и 3-метилбутан-1-ола) составляло не менее 1,3.

Следующие колонки и условия ГХ являются подходящими для примера:

1. удерживающая полость 1 м × 0,32 мм i.d., соединенная с колонкой CP-WAX 57 CB 50 м × 0,32 мм i.d., толщина пленки 0,2 мкм (стабилизированный полиэтиленгликоль), за которой следует колонка Carbowax 400 – 50 м × 0,32 мм i.d., толщина пленки 0,2 мкм. (Колонки соединены с помощью зажимных соединителей):

2. удерживающая полость 1 м × 0,32 мм i.d., соединенная с колонкой CP-WAX 57 CB 50 м × 0,32 мм i.d., толщина пленки 0,2 мкм (стабилизированный полиэтиленгликоль). (Удерживающую полость соединяют с помощью зажимного соединителя):

3. упакованная колонка (5 % CW 20M, Carbopak B), 2 м × 2 мм внутренний диаметр:

7. Отбор и пробы

Лабораторная проба. При получении измеряется алкогольная крепость каждой пробы (6.1).

8. Порядок работы (используется для валидированного метода)

8.1. Испытуемая проба

8.1.1. взвешивают соответствующий герметичный мерный сосуд и записывают его вес;

8.1.2. пипеткой переносят 9 мл лабораторной пробы в сосуд и записывают его вес (M_ПРОБА);

8.1.3. добавляют 1 мл стандартного раствора E (5.14.5) и записывают вес (M_IS).

8.1.4. сильно встряхивают испытуемый материал (не менее 20 переворачиваний). Пробы должны храниться при температуре ниже 5 °C до анализа, чтобы свести к минимуму потери в результате испарения.

8.2. Контрольный тест

8.2.1. с помощью весов с точностью до четырех десятичных знаков (6.2) взвешивают соответствующий герметично закрытый мерный сосуд и записывают его вес;

8.2.2. пипеткой переносят 9 мл раствора этанола 400 мл/л (5.13) и записывают вес;

8.2.3. добавляют 1 мл стандартного раствора E (5.14.5) и записывают вес;

8.2.4. энергично встряхивают испытуемый материал (не менее 20 переворачиваний); Пробы должны храниться при температуре ниже 5 °C до анализа, чтобы свести к минимуму потери в результате испарения.

8.3. Предварительный тест

Вводят стандартный раствор C (5.14.3) для обеспечения разделения всех аналитов с минимальным разрешением 1,3 (за исключением 2-метилбутан-1-ола и 3-метилбутан-1-ола).

8.4. Калибровка

Калибровку необходимо проводить с помощью следующей процедуры. Линейность обеспечивается путем последовательного анализа трех проб каждого стандартного раствора линейности (5.14.6), содержащего внутренний стандарт (IS). Из максимальных плато или пиков интегратора для каждого введения рассчитывают отношение R для каждого конгенера
и строят график R в зависимости от концентрации конгенера по отношению к внутреннему стандарту (IS). Должна получиться линейная диаграмма с коэффициентом корреляции не менее 0,99.

8.5. Определение

Вводят стандартный раствор C (5.14.3) и 2 стандартных раствора QC (5.14.7). Продолжают с неизвестными пробами (приготовленными в соответствии с подпунктами 8.1 и 8.2), добавляя стандартный раствор QC через каждые десять проб для обеспечения аналитической стабильности. Вводят стандартный раствор C (5.14.3) после каждых пяти проб.

9. Подсчеты

Можно использовать автоматическую систему обработки данных, при условии, что данные могут быть проверены с помощью принципов, описанных в методе, указанном ниже.

Измеряют каждое максимальное плато или пик для конгенера и пики внутреннего стандарта.

9.1. Расчет фактора отклика

По хроматограмме введения стандартного раствора C (5.14.3) рассчитывают факторы отклика для каждого конгенера с помощью уравнения (1).

где:

IS = внутренний стандарт;

Конц.конгенера = концентрация конгенера в растворе C (5.14.3);

Конц. IS = концентрация внутреннего стандарта C (5.14.3).

9.1.2. Анализ пробы

Используя приведенное ниже уравнение (2), рассчитывают концентрация каждого конгенера в пробах.

где:

M_ПРОБА = масса пробы (8.1.2);

M_IS = масса внутреннего стандарта (8.1.3);

Конц. IS = концентрация внутреннего стандарта в растворе E (5.14.5);

RF = фактор отклика, рассчитанный на основании уравнения 1.

9.1.3. анализ стандартного решения по контролю качества

Используя приведенное ниже уравнение (3), рассчитывают процентное восстановление целевого значения для каждого конгенера
в стандартах контроля качества (5.14.7):

Концентрацию аналита в стандарте QC рассчитывают с учетом уравнений (1) и (2) приведенных выше.

9.2. окончательное представление результатов

Результаты преобразуют из μ/г в г на 100 литров абсолютного спирта для проб с помощью уравнения (4):

где:

ƍ = плотность кг/куб.м.

Результаты указывают с 3 значными цифрами и максимум одним десятичным знаком (например, 11,4 г на 100 л абсолютного спирта).

10. Обеспечение качества и контроль качества (для валидированного метода)

С помощи приведенного выше уравнения (2) рассчитывают концентрацию каждого конгенера в стандартных растворах для контроля качества, приготовленных в соответствии с процедурой, описанной в подпунктах 8.1.1-8.1.4. При помощи уравнения (3) рассчитывают процент восстановления целевого значения. Если результаты анализа находятся в пределах ± 10 % от теоретических значений для каждого конгенера, можно приступать к анализу. В противном случае рекомендуется провести расследование для выявления причины неточности и принятия соответствующих мер по исправлению ситуации.

11. Характеристики эффективности метода (точность)

Статистические результаты межлабораторных испытаний

В следующих таблицах приведены значения для следующих соединений: этанол, этилацетат, ацеталь, общий этанол, метанол, бутан-2-ол, пропан-1-ол, бутан-1-ол, 2-метил-пропан-1-ол, 2-метил-бутан-1-ол, 3-метил-бутан-1-ол.

В ходе международного исследования эффективности метода, проведенного с использованием процедур, признанных на международном уровне, были получены следующие данные.

Раздел 3

Определение летучей кислотности спиртосодержащих напитков

1. Область применения

Метод был утвержден в ходе межлабораторных испытаний на роме, brandy, водка (ракиу) из виноградной выжимки и водка (ракиу) плодовая при уровнях от 30 мг/л до 641 мг/л.

2. Нормативные ссылки

SM SR EN ISO 3696:2006 – Вода, используемая в аналитических лабораториях. Технические условия и методы анализа.

3. Определения

3.1. летучая кислотность рассчитывается путем вычета постоянной кислотности из общей кислотности;

3.2. общая кислотность представляет собой сумму титруемых кислотностей;

3.3. фиксированная кислотность представляет собой кислотность остатка, оставшегося после выпаривания до сухого состояния спиртового напитка.

4. Принцип

Общая кислотность и фиксированная кислотность определяются титрованием или потенциометрическим методом.

5. Реактивы и материалы

В ходе анализа, если не указано иное, используются только реагенты с признанной аналитической чистотой и вода не ниже 3 класса, согласно определению в SM SR EN ISO 3696:2006:

5.1. раствор гидроксида натрия (NaOH) 0,01 М;

5.2. смешанный индикаторный раствор:

взвесить 0,1 г индиго кармина и 0,1 г раствора фенолового красного; растворить в 40 мл воды и дополнить до 100 мл этанолом.

6. Приборы и оборудование

Непрямые лабораторные приборы, мерная посуда А и следующее:

6.1. водяной насос;

6.2. роторный испаритель или ультразвуковая ванна;

6.3. оборудование для потенциометрического титрования (дополнительно).

7. Отбор и пробы

Перед анализом пробы хранятся при комнатной температуре.

8. Порядок работы

8.1. Общая кислотность

8.1.1. Подготовка пробы

Спиртосодержащий напиток подвергают ультразвуковому воздействию (ультразвук) или встряхивают в течение двух минут в вакууме для удаления углекислого газа, если это необходимо.

8.1.2. Титрование

Пипеткой переносят 25 мл спиртосодержащего напитка в колбу Эрленмейера объемом 500 мл.

Добавляют примерно 200 мл кипяченой и охлажденной дистиллированной воды (свежеприготовленной ежедневно) и 2-6 капель смешанного индикаторного раствора (5.2).

Титруют раствором гидроксида натрия 0,01 М (5.1) до тех пор, пока желто-зеленый цвет не станет фиолетовым в случае бесцветного спиртового напитка и, соответственно, желто-коричневый цвет не станет красно-коричневым в случае коричневого спиртового напитка.

Титрование можно также проводить потенциометрически до pH 7,5.

Объем добавленного 0,01 М раствора гидроксида натрия записывают как n1 мл.

8.1.3. Расчет

Общая кислотность (AT′), выраженная в миллиэквивалентах на литр спиртосодержащего напитка, равна 0,4 × n₁.

Общая кислотность (AT′), выраженная в миллиграммах уксусной кислоты на литр спиртосодержащего напитка, равна 24 × n₁.

8.2. Фиксированная кислотность

8.2.1. Подготовка пробы

Дают испариться 25 мл спиртового напитка до высыхания:

Пипеткой переносят 25 мл спиртового напитка в цилиндрическую испарительную пластину с плоским дном диаметром 55 мм. В течение первого часа испарения испарительную пластину помещают на крышку кипящей водяной бани таким образом, чтобы жидкость не кипела, так как кипение приводит к потерям в результате разбрызгивания.

Завершают сушку, поместив испарительную пластину в сушильный шкаф при температуре 105 °C на два часа. Дать испарительной пластине остыть в десикаторе.

8.2.2. Титрование

Остаток, оставшийся после выпаривания, растворяют кипяченой и охлажденной дистиллированной водой (свежеприготовленной ежедневно), доводят до объема около 100 мл и добавляют 2-6 капель смешанного индикаторного раствора (5.2).

Титруют раствором гидроксида натрия 0,01 М (5.1).

Титрование можно также проводить потенциометрически до pH 7,5.

Объем добавленного раствора гидроксида натрия 0,01 М записывают с погрешностью n₂ мл.

8.2.3. Расчет

Фиксированная кислотность (AF), выраженная в миллиэквивалентах на литр спиртосодержащего напитка, равна 0,4 × n₂.

Фиксированная кислотность (AF), выраженная в миллиграммах уксусной кислоты на литр спиртосодержащего напитка, равна 24 × n₂.

9. Расчет летучей кислотности

9.1. Выражается в миллиэквивалентах на литр:

где:

AT = общая кислотность в миллиэквивалентах на литр;

AF = постоянная кислотность в миллиэквивалентах на литр;

Летучая кислотность, AV, в миллиэквивалентах на литр, равна:

AT – AF;

9.2. выражается в миллиграммах уксусной кислоты на литр:

где:

AT′ = общая кислотность в миллиграммах уксусной кислоты на литр;

AF′ = постоянная кислотность в миллиграммах уксусной кислоты на литр;

Летучая кислотность, AV, в миллиграммах уксусной кислоты на литр, равна:

AT′ – AF′;

9.3. выражается в граммах уксусной кислоты на hl чистого спирта 100 % об. и равна:

где:

A – крепость спиртосодержащего напитка в объеме.

10. Характеристики эффективности метода (точность)

10.1. Статистические результаты межлабораторных испытаний

В ходе международного исследования эффективности метода, проведенного с использованием процедур, признанных на международном уровне, были получены следующие данные [1] [2].

Глава IV

АНЕТОЛ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРАНС-АНЕТОЛА В СПИРТОСОДЕРЖАЩИХ

НАПИТКАХ МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

1. Область применения

Настоящий метод предназначен для определения содержания транс-анетола в спиртосодержащих напитках с ароматом аниса методом газовой капиллярной хроматографии.

2. Нормативные ссылки

SM SR EN ISO 3696:2006 – Вода, используемая в аналитических лабораториях. Технические условия и методы анализа.

3. Принцип

Концентрация транс-анетола в спиртосодержащем напитке определяется при помощи газовой хроматографии (ГХ). После добавления одинакового количества внутреннего эталона, например 4-алиланизола (эстрагола), в случае, когда эстрагол естественным образом не присутствует в пробе, тестовая проба, с одной стороны, и эталонный раствор, содержащий транс-анетол известной концентрации, с другой стороны, оба затем разбавляют 45 % раствором этанола и вводят непосредственно в хроматограф. Перед подготовкой и анализом пробы спиртосодержащих напитков с высоким содержанием углеводов необходимо провести экстракцию.

4. Реактивы и материалы

В ходе анализа используются исключительно реагенты чистотой не менее 98 % и вода не ниже 3 класса в соответствии с определением стандарта SM SR EN ISO 3696:2006.

Эталонные вещества должны храниться в прохладном (около 4 °C) и защищенном от света месте, в алюминиевых контейнерах или специальных флаконах для реагентов из окрашенного (коричневого) стекла. Пробки должны быть снабжены, предпочтительно, алюминиевым уплотнителем. Транс-анетол перед использованием необходимо "разморозить" из кристаллического состояния, но при этом его температура не должна превышать 35 °C.

4.1. Этанол 96 % об. (CAS 64-17-5);

4.2. 1-метокси-4-(1-пропенил) бензол; (транс-анетол) (CAS 4180-23-8);

4.3. предлагаемый внутренний эталон: 4-алиланизол, (эстрагол) (CAS 140-67-0);

4.4. этанол 45 % об.

К 378 г этанола 96 % об. добавляют 560 г дистиллированной воды.

4.5. Приготовление эталонных растворов

Все эталонные растворы должны храниться при комнатной температуре (15-35 °C) в защищенном от света месте в алюминиевых емкостях или флаконах из окрашенного (коричневого) стекла для реагентов. Пробки желательно должны быть снабжены алюминиевым уплотнителем.

Транс-анетол и 4-алиланизол практически нерастворимы в воде, поэтому их необходимо растворить в небольшом количестве этанола 96 % (подпункт 4.1) перед добавлением этанола 45 % (подпункт 4.4).

Маточные растворы необходимо обновлять еженедельно.

4.5.1. Эталонный раствор A

Маточный раствор транс-анетола (концентрация: 2 г/л)

Мерной колбой объемом 20 мл (или 400 мг в 200 мл и т. д.) отмеряют 40 мг транс-анетола (подпункт 4.2). Добавляют немного этанола 96 % (подпункт 4.4) и доводят до объема этанолом 45 % об. (подпункт 4.4). Хорошо перемешивают.

4.5.2. Внутренний эталонный раствор B

Маточный раствор внутреннего эталона, например, эстрагола (концентрация: 2 г/л)

Мерной колбой объемом 20 мл (или 400 мг в 200 мл и т. д.). отмеряют 40 мг эстрагола (подпункт 4.3). Добавляют немного этанола 96 % (подпункт 4.1) и доводят до объема этанолом 45 % об. (подпункт 4.4). Хорошо перемешивают.

4.5.3. Растворы, используемые для проверки линейности отклика пламенно-ионизационного детектора

Линейность отклика пламенно-ионизационного детектора следует контролировать с целью анализа ряда концентраций транс-анетола в спиртосодержащих напитках от 0 г/л до 2,5 г/л. Во время процедуры анализа неизвестные пробы спиртосодержащих напитков, подлежащие анализу, разбавляют в 10 раз (подпункт 8.3). Для условий анализа, описанных в настоящем методе, исходные растворы, соответствующие концентрациям 0 г/л, 0,05 г/л, 0,1 г/л, 0,15 г/л, 0,2 г/л и 0,25 г/л транс-анетола в анализируемой пробе, готовят следующим образом: с помощью пипеток отбирают 0,5 мл, 1 мл, 1,5 мл, 2 мл и 2,5 мл маточного раствора А (подпункт 4.5.1) и помещают отборы в отдельные градуированные колбы объемом 20 мл. В каждую колбу с помощью пипетки вводят 2 мл внутреннего эталонного раствора B (подпункт 4.5.2) и доводят до объема 45 % этанолом. Хорошо перемешивают.

В качестве контрольного раствора (подпункт 8.4) используют раствор 0 г/л.

4.5.4. Раствор-эталон C

Вводят пипеткой 2 мл раствора-эталона A (подпункт 4.5.1) в градуированную колбу объемом 20 мл, добавляют 2 мл раствора-эталона B (подпункт 4.5.2) и доводят до объема 45 % этанолом (подпункт 4.4). Хорошо перемешивают.

5. Необходимые приборы и оборудование:

5.1. газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором и интегратором или любой другой системой сбора и обработки данных, способный измерять площади или высоту пиков и оснащенный автоматическим устройством отбора проб или приборами, необходимыми для ручного введения пробы;

5.2. инжектор разделенный/неразделенный;

5.3. капиллярная хроматографическая колонка со следующими характеристиками, например:

длина: 50 м;

внутренний диаметр: 0,32 мм;

толщина пленки: 0,2 мкм;

стационарная фаза: FFAP – пористый сшитый полимер из полиэтиленгликоля, модифицированного TPA;

5.4. лабораторные материалы обычного использования: стеклянная посуда с градуировкой класса A, аналитические весы (точность: ± 0,1 мг).

6. Условия проведения газовой хроматографии

Тип и размеры колонки, а также условия проведения газовой хроматографии должны обеспечивать отделение анетола от внутреннего эталона и любых других веществ, которые могут вмещаться. Типичные условия работы для колонки, представленной в качестве примера в подпункте 5.3, следующие:

6.1. газ-носитель: аналитический гелий;

6.2. расход: 2 мл/мин;

6.3. температура инжектора: 250 °C;

6.4. температура детектора: 250 °C;

6.5. температурные условия печи: изотермический этаж 180 °C в течение 10 минут;

6.6. объем впрыска: 1 мкм, соотношение 1:40.

7. Пробы

Пробы должны храниться при комнатной температуре, в защищенном от света и холода месте.

8. Порядок работы

8.1. Поиск возможного присутствия эстрагола в пробе

Для того чтобы убедиться, что проба не содержит эстрагола в естественном виде, необходимо провести анализ маркера без добавления внутреннего стандарта. Если проба естественным образом содержит эстрагол, то выбирают другой внутренний эталон (например, ментол).

С помощью пипетки в градуированную колбу объемом 20 мл вводят 2 мл пробы и доливают до объема 45 % этанолом (подпункт 4.4). Хорошо перемешивают.

8.2. Подготовка неизвестных проб

С помощью пипетки в градуированную колбу объемом 20 мл вводят 2 мл пробы, затем добавляют 2 мл раствора внутреннего эталона B (подпункт 4.5.2) и заполняют по емкости этанолом 45 % об. (подпункт 4.4). Хорошо перемешивают.

8.3. Индикаторный анализ

В градуированную колбу объемом 20 мл вводят пипеткой 2 мл раствора внутреннего эталона B (подпункт 4.5.2) и заполняют по емкости этанолом 45 % об. (подпункт 4.4). Хорошо перемешивают.

8.4. Тест на линейность

Перед началом анализа проверяют линейность отклика пламенно-ионизационного детектора, анализируя на линейность три раза подряд каждый из стандартных растворов (подпункт 4.5.3).

От площадей или высот пика интегратора для каждого введения строят график концентрации, в г/л, соответствующего исходного раствора, в зависимости от соотношения R.

R = площадь или высота пика транс-анетола, разделенная на высоту или площадь пика эстрагола.

Получают линейное представление.

8.5. Определение

Вводят индикаторный раствор (подпункт 8.3), затем стандартный раствор С (подпункт 4.5.4), затем один из эталонов линейности (подпункт 4.5.3), который будет служить образцом контроля качества (его можно выбрать с учетом вероятной концентрации транс-анетола в неизвестной пробе), затем пять неизвестных проб (подпункт 8.2). Для обеспечения аналитической стабильности после каждой серии из пяти неизвестных проб вводят контрольный образец линейности (контроля качества).

9. Расчет фактора отклика

Измеряют площади пиков (с помощью интегратора или другой системы сбора и управления данными) или высот пика (ручная интеграция) для транс-анетола и внутреннего эталона.

9.1. Расчет фактора отклика (RF_i)

Фактор отклика рассчитывают следующим образом:

RF_i = (C_i/площадь или высота_i) * (площадь или высота_is/C_is),

где:

C_i – концентрация транс-анетола в эталонном растворе A (подпункт 4.5.1);

C_{is –} концентрация внутреннего стандарта в стандартном растворе B (подраздел 4.5.2);

аria_{i –} площадь (или высота) пика транс-анетола;

aria_{is –} площадь (или высота) пика внутреннего стандарта.

Фактор RF_i рассчитывают по пяти пробам раствора C (подпункт 4.5.4).

9.2. Анализ растворов для тестирования линейности отклика пламенно-ионизационного детектора

Вводят растворы для тестирования линейности (подраздел 4.5.3).

9.3. Анализ пробы

Вводят раствор неизвестной пробы (подпункт 8.2).

10. Подсчет результатов

Формула для расчета концентрации транс-анетола выглядит следующим образом:

c_i = C_is * (площадь или высота/площадь или высота_is)*RF_i,

где:

c_i – неизвестная концентрация транс-анетола;

C_is – концентрация внутреннего эталона в неизвестной пробе (подпункт 4.5.2);

площадь или высота_i – площадь или высота пика транс-анетола;

площадь или высота_is – площадь или высота пика внутреннего эталона;

RF_{i –} коэффициент отклика (рассчитывают в соответствии с подпунктом 9.1).

Концентрация транс-анетола выражается в граммах на литр с точностью до десятичного знака.

11. Обеспечение и контроль качества

Хроматограммы должны показывать хорошее отделение анетола от внутреннего эталона, а также от любых других веществ, которые могут проникнуть. Значение RF_i рассчитывается по результатам пяти инъекций раствора C (подпункт 4.5.4). В случае если коэффициент вариации [CV % = (стандартное отклонение/среднее)*100] составляет около 1%, среднее значение фактора RF_i является приемлемым.

Приведенный выше расчет следует использовать для расчета концентрации транс-анетола в выбранной пробе для контроля качества между растворами с целью проверки линейности (подраздел 4.5.3).

Если рассчитанные средние результаты, основанные на анализе раствора для проверки линейности, выбранного в качестве пробы для внутреннего контроля качества (ICC), находятся в пределах 2,5 % от их теоретического значения, то результаты, полученные для неизвестных проб, считаются приемлемыми.

12. Обработка проб спиртосодержащих напитков и ликеров с высоким содержанием сахара и проб ликера перед анализом методом газовой хроматографии

Экстракция алкоголя из спиртосодержащих напитков с высоким содержанием сахара проводят с целью определения концентрации транс-анетола методом капиллярной газовой хроматографии.

12.1. Принцип

Отделяют аликвотную долю и добавляют внутренний эталон в концентрации, аналогичной концентрации аналита (транс-анетола), присутствующего в ликере. Добавляют додекагидрат фосфата натрия и безводный сульфат аммония. Смесь хорошо взбалтывают и ставят в холодильник. Две фазы разделяются, и верхняя спиртовая фаза восстанавливается. Отбирают аликвотную долю этой спиртовой фазы и разбавляют 45 % раствором этанола (подпункт 4.4). Следует отметить, что на данном этапе внутренний эталон не добавляется, так как он уже был добавлен. Полученный раствор анализируют методом газовой хроматографии.

12.2. Реактивы и материалы

При экстракции должны использоваться только реагенты чистотой не менее 99 %:

12.2.1. безводный сульфат аммония (CAS 7783-20-2);

12.2.2. дибазифосфат натрия, додекагидрат (CAS 10039-32-4).

12.3. Приборы и оборудование

Конические колбы, разделительные колбы, холодильник.

12.4. Порядок работы

12.4.1. в приложении № 1: Поиск эстрагола в пробе

Для того чтобы убедиться, что проба не содержит эстрагола в естественном виде, необходимо провести отбор проб на маркер (подпункт 12.6.2) и проанализировать их без внутреннего эталона. Если будет выявлено, что проба содержит эстрагол в естественном состоянии, необходимо выбрать другой внутренний эталон.

12.4.2. Извлечение

С помощью пипетки в коническую колбу вводят 5 мл этанола 96 % об. (подпункт 4.1), затем последовательно добавляют 50 мг внутреннего эталона (подпункт 4.3) и 50 мл пробы. Добавляют 12 г безводного сульфата аммония (подпункт 12.2.1) и 8,6 г двухосновной фосфата натрия, додекагидрата (подпункт 12.2.2). Коническую колбу закрывают.

Взбалтывают колбу в течение не менее тридцати минут. Можно использовать механическое взбалтывающее устройство, но не тефлоновую магнитную палочку для взбалтывания, так как тефлон поглощает часть аналита. Следует иметь в виду, что добавленные соли не растворятся полностью.

Закрытую колбу помещают в холодильник (T <5 °C) не менее чем на два часа.

После этого должны проявиться два четких слоя в жидкой форме и твердый осадок. Слой спирта должен быть прозрачным. Если этого не произошло, колбу снова помещают в холодильник до появления четкого разделения.

Когда слой спирта становится прозрачным, осторожно отбирают часть (например, 10 мл), не нарушая водный слой, помещают во флакон из коричневого стекла и плотно закрывают.

12.4.3. Приготовление экстракта проб для анализа

Экстракт (подпункт 12.4.2) должен достичь комнатной температуры.

Из слоя спирта экстракта пробы при комнатной температуре отбирают пипеткой 2 мл, переносят в мерную колбу объемом 20 мл, доводят до объема 45 % этанолом (подпункт 4.4) и хорошо перемешивают.

12.5. Определение

Следует руководствоваться порядком работы, представленным в подпункте 8.5.

12.6. Расчет результатов

Для расчета результатов используется следующая формула:

где:

m_is – масса отобранного (подпункт 12.4.2) внутреннего эталона (подпункт 4.3) (в миллиграммах);

V – объем неизвестной пробы (50 мл);

RF_i – фактор отклика (подпункт 9.1);

aria_i – площадь пика транс-анетола;

aria_is – площадь пика внутреннего эталона.

Результаты выражаются в граммах на литр с точностью до одного десятичного знака.

12.7. Контроль и обеспечение качества

Следует соблюдать порядок работы, представленный в подпункте 11.

13. Характеристики эффективности метода (точность)

Статистические результаты межлабораторных испытаний

В таблицах ниже приведены значения анетола.

В ходе международного исследования характеристик метода, проведенного в соответствии с официальными процедурами, принятыми на международном уровне, получены следующие данные.

Глава V

ГЛИЦИРРИЗИНОВАЯ КИСЛОТА. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ

КИСЛОТЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ

1. Область применения

Настоящий метод подходит для определения глицирризиновой кислоты в спиртосодержащих напитках с анисовым ароматом методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Положение об определении, описании, представлении и этикетировании спиртосодержащих напитков, утвержденное Постановлением Правительства № 589/2023, предусматривает, что любой спиртосодержащий напиток с ароматом аниса, называемый pastis, должен содержать глицирризиновую кислоту в количестве от 0,05 г до 0,5 г на литр.

2. Нормативные ссылки

SM SR EN ISO 3696:2006 – Вода, используемая в аналитических лабораториях. Технические условия и методы анализа.

3. Принцип

Концентрация глицирризиновой кислоты определяется методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детектированием. Эталонный раствор и проба фильтруются и вводятся отдельно и непосредственно в систему ВЭЖХ.

4. Реактивы и материалы

В ходе анализа используются исключительно реактивы, пригодные для жидкостной хроматографии, абсолютный этанол и вода класса 3 в соответствии с определением стандарта SM SR EN ISO 3696:2006.

4.1. этанол 96 % об. (CAS 64-17-5);

4.2. аммония глицирризинат C₄₂H₆₂O₁₆.NH₃ (соль моноаммония глицирризиновой кислоты)

(Молярная масса: 839,98), (CAS 53956-04-0): чистота не менее 90 %;

(Молярная масса глицирризиновой кислоты: 822,94);

4.3. кристаллизующаяся уксусная кислота CH₃COOH, (CAS 64-19-7);

4.4. метанол, CH₃OH (CAS 67-56-1);

4.5. этанол 50 % об.

На 1 000 мл при 20 °C:

4.5.1. этанол 96 % об. (подпункт 4.1): 521 мл,

4.5.2. вода (пункт 2.): 511 мл;

4.6. приготовление растворов для элюции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

4.6.1. элюирующий раствор A (пример):

80 частей (объемов) воды (пункт 2);

20 частей (объемов) уксусной кислоты (подпункт 4.3).

Элюирующий раствор дегазируют в течение пяти минут.

Если используемая вода не была пропущена через микрофильтр, рекомендуется отфильтровать приготовленный элюирующий растворов с помощью фильтра для органических растворов с диаметром пор не более 0,45 мкм.

4.6.2. Элюирующий раствор B

Метанол (подпункт 4.4)

4.7. Приготовление эталонных растворов

Все эталонные растворы должны обновляться каждые два месяца.

4.7.1. Эталонный раствор C

С точностью до 0,1 мг взвешивают 25 мг аммония глицирризината (подпункт 4.2) в градуированной колбе объемом 100 мл. Добавляют 50 % об. этанол (подпункт 4.5) и растворяют аммония глицирризинат. После растворения доводят до метки новым количеством 50 % об. этанола (подпункт 4.5).

Процеживают через фильтр для органических растворов.

4.7.2. Эталонные растворы (используются для контроля линейности отклика приборов)

Готовят маточный раствор 1,0 г/л, поместив с погрешностью не более 0,1 мг 100 мг аммония глицирризината в градуированную колбу объемом 100 мл. Добавляют немного этанола 50 % об. (подпункт 4.5) и растворяют аммония глицирризинат. После растворения доводят до метки новым количеством этанола 50 % об. (подпункт 4.5).

Готовят по меньшей мере четыре других раствора аммония глицирризината, соответствующих 0,05 г/л, 0,1 г/л, 0,25 г/л и 0,5 г/л, отбирая с помощью пипетки соответственно 5 мл, 10 мл, 25 мл и 50 мл из исходного раствора 1,0 г/л в отдельные градуированные колбы объемом 100 мл. Затем доводят до метки новым количеством этанола 50 % об. (подпункт 4.5) и хорошо перемешивают.

Все растворы фильтруют через фильтр для органических растворов.

5. Аппаратура и оборудование

5.1. Система разделения

5.1.1. высокоэффективная жидкостная хроматография;

5.1.2. система насосов, позволяющая получать и поддерживать постоянный или запрограммированный расход с высокой точностью;

5.1.3. система детектирования методом спектрофотометрии в УФ-диапазоне: настраивается на 254 нм;

5.1.4. система дегазации растворов;

5.2. компьютеризированный интегратор или регистратор, работающий в полной совместимости с остальной частью системы;

5.3. колонка (пример):

материал: нержавеющая сталь или стекло;

внутренний диаметр: 4-5 мм;

длина: 100-250 мм;

стационарная фаза: пористый силикагель с функциональной группой октадецил (C18), предпочтительно сферический, с максимальным размером частиц 5 мкм;

5.4. лабораторное оборудование;

5.4.1. аналитические весы (точность: 0,1 мг);

5.4.2. градуированная точная посуда (класс А);

5.4.3. устройство для фильтрации небольших объемов на микромембране.

6. Условия хроматографии

6.1. Характеристики элюции (пример):

6.1.1. дебит: 1 мл/минута;

6.1.2. раствор A = 30 %;

6.1.3. раствор B = 70 %.

6.2. детектирование:

6.1.2. УФ = 254 нм.

7. Порядок работы

7.1. Подготовка пробы спиртосодержащего напитка

При необходимости фильтруют через фильтр для органических растворов (диаметр пор: 0,45 мкм).

7.2. Определение

После стабилизации хроматографических условий:

7.2.1. вводят 20 мкл эталонного раствора C (подпункт 4.7.1);

7.2.2. вводят 20 мкл раствора пробы;

7.2.3. сравнивают две хроматограммы. Определяют пики глицирризиновой кислоты по времени их удерживания. Измеряют их площади (или высоту) и рассчитывают концентрацию в г/л с точностью до двух десятичных знаков по следующей формуле:

где:

c – концентрация в г/л глицирризиновой кислоты в анализируемом спиртосодержащем напитке;

C – концентрация в г/л аммония глицирризината в эталонном растворе;

h – площадь (или высота) пика глицирризиновой кислоты
в анализируемом спиртосодержащем напитке;

H – площадь (или высота) пика глицирризиновой кислоты в эталонном растворе;

P – чистота аммония глицирризината, используемого в качестве эталонного вещества (в %);

823 – молярная масса глицирризиновой кислоты;

840 – молярная масса аммония глицирризината.

8. Характеристики эффективности метода (точность)

Статистические результаты межлабораторного тестирования

В таблице ниже приведены значения глицирризиновой кислоты.

В ходе международного исследования эффективности метода, проведенного в соответствии с международными процедурами, получены следующие данные.

Глава VI

ХАЛКОНЫ. МЕТОД ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ ПРОВЕРКИ НАЛИЧИЯ

ХАЛКОНОВ В PASTIS

1. Область применения

Данный метод подходит для определения наличия халконов в напитках с ароматом аниса. Халконы – это природные красители из семейства флавоноидов, содержащиеся в солодке (Glycyrrhiza glabra).

Чтобы спиртосодержащий напиток с ароматом аниса мог называться "pastis" в соответствии с Положением об определении, описании, представлении и этикетировании спиртосодержащих напитков, утвержденным Постановлением Правительства № 589/2023, он должен содержать халконы.

2. Нормативные ссылки

SM SR EN ISO 3696:2006 – Вода, используемая в аналитических лабораториях. Технические условия и методы анализа.

3. Принцип

Готовят эталонный раствор экстракта солодки. Наличие или отсутствие халконов определяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием.

4. Реактивы и материалы

В ходе анализа используются только реактивы, пригодные для высокоэффективной жидкостной хроматографии. Этанол должен быть 96 % об. Используется вода только 3 класса (в соответствии с определением нормы SM SR EN ISO 3696:2006).

4.1. этанол 96 % об. (CAS 64-17-5);

4.2. ацетонитрил CH₃CN (CAS 75-05-8);

4.3. эталонное вещество: Glycyrrhiza glabra (солодка)

Солодка (Glycyrrhiza glabra) крупного помола. Средний размер частиц типа "палочки": длина 10-15 мм, толщина 1-3 мм;

4.4. ацетат натрия CH₃COONa (CAS 127-09-3);

4.5. кристаллизирующаяся уксусная кислота CH₃COOH (CAS 64-19-7);

4.6. приготовление растворов.

4.6.1. Этанол 50 % об.

На 1 000 мл при 20 °C:

4.6.1.1. этанол 96 % об. (подпункт 4.1): 521 мл

4.6.1.2. вода (пункт 2): 511 мл.

4.6.2. Раствор A: ацетонитрил

Ацетонитрил (подпункт 4.2) аналитической чистоты для ВЭЖХ дегазируют.

4.6.3. Раствор B: 0,1 М раствор натрия ацетата с pH 4,66

Взвешивают 8,203 г ацетата натрия (подпункт 4.4), добавляют 6,005 г кристаллизующейся уксусной кислоты (подпункт 4.5) и доводят до 1 000 мл водой (пункт 2) в градуированной колбе.

5. Приготовление эталонного экстракта из Glycyrrhiza glabra (подпункт 4.3):

5.1. взвешивают 10 г измельченной солодки (Glycyrrhiza glabra) (подпункт 4.3) и помещают в круглодонную дистилляционную колбу;

5.1.1. добавляют 100 мл этанола 50 % об. (подпункт 4.6.1);

5.1.2. подвергают рефлюксной дистилляции в течение одного часа;

5.1.3. фильтруют;

5.1.4. фильтрат сохраняют для дальнейшего использования;

5.2. извлекают экстракт солодки, находящийся в фильтре;

5.2.1. помещают в круглодонную дистилляционную колбу;

5.2.2. добавляют 100 мл этанола 50 % об. (подпункт 4.6.1);

5.2.3. подвергают рефлюксному кипячению в течение одного часа;

5.2.4. фильтруют. Остаток фильтрата сохраняют для дальнейшего использования;

5.3. экстракцию солодки проводят три раза подряд;

5.4. объединяют три фильтрата;

5.5. раствор (подпункт 5.4) выпаривают с помощью ротационного испарителя;

5.6. извлекают остаток экстракта (подпункт 5.5) 100 мл этанола 50 % об. (подпункт 4.6.1).

6. Аппаратура и оборудование

6.1. система разделения:

6.1.1. высокоэффективная жидкостная хроматография;

6.1.2. насосная система, позволяющая достигать и поддерживать постоянный или заданный дебит при высоком давлении;

6.1.3. система детектирования с помощью спектрофотометрии в УФ-видимом диапазоне, регулируемая на 254 нм и 370 нм;

6.1.4. система дегазации растворов;

6.1.5. колонная печь с регулируемой температурой до 40 °C ± 0,1 °C;

6.2. компьютеризированный интегратор или регистратор, совместимый с остальной частью системы разделения;

6.3. колонка:

материал: нержавеющая сталь или стекло;

внутренний диаметр: 4-5 мм;

стационарная фаза: пористый силикагель с функциональной группой типа октадецил (C18), с максимальным размером частиц 5 мкм (сетчатая фаза);

6.4. обычное лабораторное оборудование, в частности:

6.4.1. аналитические весы (точность: ± 0,1 мг);

6.4.2. дистилляционный аппарат, оснащенный рефлюксным конденсатором, включающий, например:

6.4.2.1. круглодонная колба объемом 250 мл со стандартизированным шлифом;

6.4.2.2. рефлюксный конденсатор длиной 30 см;

6.4.2.3. источник тепла (любое нагревание [пирогенез] экстрагируемых веществ должно быть исключено с помощью соответствующего устройства);

6.4.3. ротационный испаритель;

6.4.4. фильтрующее устройство (например, воронка Бюхнера);

6.5. условия хроматографии (пример);

6.5.1. характеристики элюции растворов A (подпункт 4.6.2) и B (подпункт 4.6.3):

6.5.1.1. переход от градиента 20/80 (об./об.) к 50/50 (об./об.) в течение 15 минут;

6.5.1.2. переход от градиента 50/50 (об./об.) к 75/25 (об./об.) в течение 5 минут;

6.5.1.3. концентрация равна 75/25 (об./об.) в течение 5 минут;

6.5.1.4. стабилизация колонки между двумя инъекциями;

6.5.1.5. концентрация равна 20/80 (об./об.) в течение 5 минут;

6.5.2. дебит: 1 мл/минуту;

6.5.3. настройка УФ-детектора.

Детектор должен быть настроен на 370 нм для обнаружения халкона, а затем на 254 нм для обнаружения глицирризиновой кислоты.

Изменение длины волн (с 370 нм на 254 нм) должно производиться за 30 минут до начала пика элюции глицирризиновой кислоты.

7. Порядок работы

7.1. Подготовка пробы спиртосодержащего напитка

Фильтруется через фильтр для органических растворов (диаметр пор: 0,45 мкм).

7.2. Подготовка остаточного экстракта солодки (подпункт 5.6)

Перед анализом проводят разбавление в соотношении 1:10 в этаноле 50 % об. (подпункт 4.6.1).

7.3. Определение

7.3.1. Вводят 20 мкл приготовленного экстракта солодки (подпункт 7.2). Проводят анализ в хроматографических условиях, описанных выше (подпункт 6.5);

7.3.2. Вводят 20 мкл пробы (спиртосодержащий напиток с ароматом аниса, подпункт 7.1). Проводят анализ в условиях хроматографии, описанных выше (подпункт 6.5);

7.3.3. сравнивают две полученные хроматограммы. Хроматограммы должны иметь большое сходство в области выхода халконов (при детектировании при 370 нм в условиях анализа, описанных выше).

См. рисунок № 1.

8. Хроматограмма характерная для pastis

Рисунок 1. Хроматограмма, полученная описанным выше методом,

указывающая на присутствие халконов в pastis

Пики с 1 по 8 соответствуют халконам, а пик 9 – глицирризиновой кислоте.

9. Характеристики эффективности метода (точность)

Результаты межлабораторных испытаний

В таблице ниже приведены характеристики эффективности для определения наличия или отсутствия халкона в pastis и спиртосодержащих напитках с ароматом аниса.

Следующие данные получены в ходе международного исследования эффективности метода, проведенного в соответствии с процедурами, признанными на международном уровне.

Глава VII

ОБЩИЕ САХАРА

1. Область применения

Метод HPLC-RI (ВЭЖХ-РИ) применяется для определения общего содержания сахаров (выраженного в виде инвертного сахара) в спиртных напитках, за исключением ликеров, содержащих яйца и молочные продукты.

Метод был валидирован посредством межлабораторного испытания для pastis, дистиллированного ликера из аниса, ликера из чирешни, "crème de" (с добавлением названия фрукта или используемого сырья) и "crème de cassis" при концентрациях от 10,86 г/л до 509,7 г/л. Тем не менее, линейность отклика прибора была доказана для концентраций в диапазоне от 2,5 г/л до 20,0 г/л.

Этот метод не предназначен для определения низкого содержания сахаров.

2. Нормативные ссылки

SM SR EN ISO 3696:2006 – Вода, используемая в аналитических лабораториях. Технические условия и методы анализа.

3. Принцип

Высокоэффективная жидкостная хроматография используется для анализа растворов сахара с целью определения концентрации глюкозы, фруктозы, сахарозы, мальтозы и лактозы.

Этот метод использует стационарную фазу алкиламина и детектацию дифференциальной рефрактометрии и приводится в качестве примера. Возможно также использование ионообменных смол в качестве стационарной фазы.

Этот метод не предназначен для определения низкого содержания сахаров.

4. Реактивы и материалы

4.1. глюкоза (CAS 50-99-7) с чистотой не менее 99 %;

4.2. фруктоза (CAS 57-48-7) с чистотой не менее 99 %;

4.3. сахароза (CAS 57-50-1) с чистотой не менее 99 %;

4.4. лактоза (CAS 5965-66-2) с чистотой не менее 99 %;

4.5. мальтоза моногидрат (CAS 6363-53-7) с чистотой не менее 99 %;

4.6. чистый ацетонитрил (CAS 75-05-8) для анализа ВЭЖХ;

4.7. дистиллированная или деминерализованная вода, предпочтительно микрофильтрованная;

4.8. растворы (пример):

элюирующий раствор состоит из:

75 частей (объемов) ацетонитрила (4.6);

25 частей (объемов) дистиллированной воды (4.7).

Перед использованием для дегазации раствор для элюирования медленно пропускают через гелий в течение 5-10 минут.

Если используемая вода не была микрофильтрована, раствор следует фильтровать с помощью фильтра для органических растворов с диаметром пор не более 0,45 мкм;

4.9. абсолютный этанол (CAS 64-17-5);

4.10. раствор этанола (5 %, v/v);

4.11. приготовление стандартного маточного раствора (20 г/л).

Взвесить по 2 г каждого из сахаров, подлежащих анализу (подпункты 4.1.-4.5.), перенести в мерную колбу объемом 100 мл.

(Примечание: 2,11 г мальтозы моногидрата эквивалентно 2 г мальтозы)

Доводят до 100 мл 5 % спиртовым раствором (4.10), взбалтывают и хранят при температуре около + 4 °C. Новый маточный раствор готовят один раз в неделю;

4.12. Приготовление стандартных рабочих растворов (2,5 г/л, 5,0 г/л, 7,5 г/л, 10,0 г/л и 20,0 г/л)

Разбавляют маточный раствор, 20 г/л, (подпункт 4.11) соответствующим образом спиртом 5 % об. (подпункт 4.10) для получения пяти стандартных рабочих растворов 2,5 г/л; 5,0 г/л; 7,5 г/л; 10,0 г/л и 20,0 г/л. Фильтруют через фильтр с диаметром пор не более 0,45 мкм (подпункт 5.3).

5. Аппаратура и оборудование

5.1. Система ВЭЖХ, способная обеспечить разрешение базовой линии для всех сахаров

5.1.1. Высокоэффективный жидкостный хроматограф, оснащенный шестиходовым инжекторным клапаном и петлей в 10 мкм или любым другим автоматическим или ручным устройством для надежной инжекции микрообъемов;

5.1.2. Насосная система, позволяющая достигать и поддерживать постоянный или запрограммированный высокоточный расход;

5.1.3. дифференциальный рефрактометр;

5.1.4.компьютеризированный интегратор или регистратор, совместимый с остальной частью системы;

5.1.5. предколонка:

рекомендуется присоединить к аналитической колонке подходящую предколонку;

5.1.6. колонка (пример):

5.1.7. условия для хроматографии (пример):

элюирующий раствор (4.8.), дебит: 1 мл/мин;

детектация: дифференциальная рефрактометрия.

Для обеспечения полной устойчивости детектора его следует включить за несколько часов до использования. Контрольная ячейка должна быть заполнена элюирующим раствором;

5.2. аналитические весы с точностью 0,1 мг;

5.3. фильтрующее устройство для небольших объемов с микромембраной 0,45 мкм.

6. Хранение проб

При получении до анализа пробы должны храниться при комнатной температуре.

7. Порядок работы

7.1. Часть A: Подготовка пробы

7.1.1. пробу взбалтывают;

7.1.2. фильтруют через фильтр с диаметром пор не более 0,45 мкм (5.3.).

7.2. Часть B: ВЭЖХ

7.2.1 определение

Вводят 10 мкл стандартных растворов (подпункт 4.12) и проб (подпункт 7.1.2). Анализ проводят в хроматографических условиях, соответствующих описанным выше;

7.2.2. если любой пик пробы имеет площадь (или высоту) больше, чем соответствующий пик в наиболее концентрированном стандартном растворе, пробу разбавляют дистиллированной водой и повторно анализируют.

8. Расчет

Сравнивают две хроматограммы, полученные для стандартного раствора и спиртосодержащего напитка. Определяют пики по времени их удерживания. Измеряют их площади (или высоту) для расчета концентраций по стандартному внешнему методу. Учитывают все разбавления, произведенные при подготовке пробы.

Конечный результат представляет собой сумму сахарозы, мальтозы, лактозы, глюкозы и фруктозы, выраженную в виде инвертного сахара в г/л.

Инвертный сахар рассчитывается как сумма всех моносахаридов и, за вычетом присутствующих дисахаридов, плюс стехиометрическое количество глюкозы и фруктозы, рассчитанное из присутствующей сахарозы.

Инвертный сахар (г/л) = глюкоза (г/л) + фруктоза (г/л) + мальтоза (г/л) +

лактоза (г/л) + (сахароза (г/л) × 1,05),

где:

1,05 = (молекулярная масса фруктозы + молекулярная масса глюкозы)/молекулярная масса сахарозы.

9. Характеристики эффективности метода (точность)

9.1. Статистические результаты межлабораторного испытания

В ходе международного исследования характеристик метода, проведенного в соответствии с официальными процедурами, принятыми на международном уровне, получены следующие данные.

Глава VIII

ЯИЧНЫЙ ЖЕЛТОК. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ

ЯИЧНОГО ЖЕЛТКА В СПИРТОСОДЕРЖАЩИХ

НАПИТКАХ МЕТОДОМ ФОТОМЕТРИИ

1. Область применения

Данный метод подходит для определения концентрации яичного желтка от 40 до 250 г/л в ликере яичном и в ликере на яичной основе.

2. Нормативные ссылки

SM SR EN ISO 3696:2006 – Вода, используемая в аналитических лабораториях. Технические условия и методы анализа.

3. Принцип

Растворимые в этаноле фосфорные соединения, содержащиеся в яичном желтке, извлекаются и определяются фотометрическим методом в виде фосфомолибденового комплекса.

4. Реактивы

4.1. вода двойной дистилляции;

4.2. диатомит;

4.3. этанол 96 % об. (CAS 64-17-5);

4.4. раствор ацетата магния 15 % (CAS 16674-78-5);

4.5. серная кислота 10 % (CAS 7664-93-9);

4.6. серная кислота 1N;

4.7. раствор одноосновного фосфата калия (CAS 778-77-0), KH₂PO₄, 0,16 г/л;

4.8. реагент для определения фосфата: растворяют 20 г молибдата аммония (CAS 12054-85-2), (NH₄)₆Mo₇O₂₄.₄H₂O в 400 мл воды при 50 °C.

В другой емкости растворяют 1 г ванадата аммония (CAS 7803-55-6), NH₄VO₃, в 300 мл теплой воды, дают остыть, затем добавляют 140 мл концентрированной азотной кислоты (CAS 7697-37-2). Охлажденные растворы соединяют в градуированной колбе объемом 1 000 мл и доводят до отметки 1 000 мл.

5. Аппаратура и оборудование

5.1. коническая колба объемом 100 мл;

5.2. ультразвуковая ванна (или магнитная мешалка);

5.3. коническая колба объемом 100 мл;

5.4. водяная баня при температуре 20 °C;

5.5. фильтр (Whatman № 4 или эквивалентный);

5.6. фарфоровый тигель (или платиновый);

5.7. кипящая водяная баня;

5.8. горячая плита;

5.9. закрытый шкаф;

5.10. градуированная колба объемом 50 мл;

5.11. градуированная колба объемом 20 мл;

5.12. спектрофотометр, настроенный на 420 нм;

5.13. кювета 1 см.

6. Пробы

Перед анализом пробы хранятся при комнатной температуре.

7. Порядок работы

7.1. Подготовка проб

7.1.1. 10 г пробы помещают в коническую колбу объемом 100 мл (подпункт 5.1);

7.1.2. постепенно добавляют 70 мл этанола небольшими порциями, перемешивая после каждого добавления. Смесь помещают в ультразвуковую баню (подпункт 5.2) на 15 минут [или перемешивают с помощью магнитной мешалки (подпункт 5.2) в течение 10 минут при комнатной температуре];

7.1.3. переносят содержимое колбы в градуированную колбу объемом 100 мл (подпункт 5.3) и добавляют объемы промывочного этанола (подпункт 4.3). Дополняют этанолом (подпункт 4.3) до эталонной отметки, затем колбы помещают в водяную баню при температуре 20 °C (подпункт 5.4). Дополняют до эталонной отметки при температуре 20 °C;

7.1.4. добавляют небольшое количество диатомита (подпункт 4.2) и фильтруют (подпункт 5.5), удаляя первые 20 мл;

7.1.5. 25 мл фильтрата переносят в фарфоровый (или платиновый) тигель (подпункт 5.6). Затем фильтрат концентрируют путем легкого выпаривания в бане с кипящей водой (подпункт 5.7) после добавления 5 мл 15 % раствора магниевого ацетата (подпункт 4.4);

7.1.6. Поставить тигль на горячую плиту (подпункт 5.8) и нагревать до почти полного высыхания.

7.1.7. сухой остаток прогревают до состояния накаливания при 600 °C в закрытой печи (подпункт 5.9) до получения белой золы. Процедура длится не менее полутора часов, но может продлиться и всю ночь;

7.1.8. золу извлекают с помощью 10 мл 10 % серной кислоты (подпункт 4.5) и переносят с помощью промывок дистиллированной водой (подпункт 4.1) в градуированную колбу объемом 50 мл (подпункт 5.10). Содержимое доводят до отметки дистиллированной водой при комнатной температуре. Отделяют 5 мл этого раствора с золой для приготовления пробного раствора, который используется для фотометрического определения фосфатов.

7.2. Фотометрическое определение фосфатов

7.2.1. Сравнительный раствор

7.2.1.1. 10 мл 10 % серной кислоты (подпункт 4.5) помещают в мерную колбу на 50 мл (подпункт 5.10) и доводят до метки дистиллированной водой (подпункт 4.1);

7.2.1.2. в мерную колбу объемом 20 мл (подпункт 5.11) вводят 5 мл данного раствора (подпункт 7.2.1.1), затем добавляют 1 мл 1N серной кислоты (подпункт 4.6) и 2 мл фосфатного реагента (подпункт 4.8). Доводят до объема 20 мл дистиллированной водой (подпункт 4.1);

7.2.1.3. закрывают, не фиксируя герметично пробку, встряхивают и нагревают в кипящей воде (подпункт 5.7) в течение 10 минут, затем оставляют остывать в водяной бане (подпункт 5.4) при 20 °C в течение 20 минут;

7.2.1.4. данный сравнительный раствор выливают в кювету 1 см (подпункт 5.13).

7.2.2. Раствор пробы

7.2.2.1. в градуированную колбу объемом 20 мл (подпункт 5.11) помещают 5 мл раствора золы (подпункт 7.1.8), затем добавляют 1 мл 1N серной кислоты (подпункт 4.6) и 2 мл фосфатного реагента (подпункт 4.8). Доводят до объема 20 мл дистиллированной водой (подпункт 4.1);

7.2.2.2. закрывают, не фиксируя герметично пробку, встряхивают и нагревают в кипящей воде (подпункт 5.7) в течение 10 минут, затем оставляют остывать в водяной бане (подпункт 5.4) при 20 °C в течение 20 минут;

7.2.2.3. образовавшийся желтый раствор немедленно анализируют спектрофотометрически (подпункт 5.12) в кювету 1 см (подпункт 5.13) при 420 нм по отношению к сравнительному раствору (подпункт 7.2.1.4).

7.2.3. Калибровочная кривая

7.2.3.1. для установления калибровочной кривой добавляют аликвотные части 2 мл реагента к фосфату (подпункт 4.8) в градуированные колбы объемом 20 мл (подпункт 5.11), содержащие по 1 мл 1N серной кислоты (подпункт 4.6) и, соответственно, 0 мл, 2 мл, 4 мл, 6 мл, 8 мл и 10 мл раствора монобазового фосфата калия (подпункт 4.7) и доводят до отметки 20 мл дистиллированной водой (подпункт 4.1);

7.2.3.2. закрывают, не фиксируя герметично пробку, встряхивают и нагревают в кипящей водяной бане (подпункт 5.7) в течение 10 минут, затем охлаждают в водяной бане (подпункт 5.4) при 20 °C в течение 20 минут и анализируют спектрофотометрически при 420 нм (подпункт 5.12) в кювете 1 см (подпункт 5.13) в сравнении с контрольным раствором (подпункт 7.2.1.4);

7.2.3.3. определение калибровочной кривой

8. Выражение результатов

Содержание в яичном желтке, выраженное в г/л, рассчитывается по следующей формуле:

где:

110 – коэффициент пересчета общего количества P2O5 в г из 100 г яичного желтка;

mg P₂O₅ – значение, определенное по калибровочной кривой;

плотность – масса на единицу объема (г/мл) яичного ликера при температуре 20 °C;

E – масса яичного ликера в г;

40 – коэффициент разбавления для порции 5 мл раствора золы.

9. Характеристики эффективности метода (точность)

Статистические результаты межлабораторных испытаний

В таблице ниже приведены значения для яичного желтка.

Следующие данные получены в ходе международного исследования характеристик метода, проведенного в соответствии с официальными процедурами, принятыми на международном уровне.

Глава IX

ОПРЕДЕЛЕНИЕ  СЛЕДУЮЩИХ  КОМПОНЕНТОВ  ДРЕВЕСНОГО

ПРОИСХОЖДЕНИЯ В СПИРТОСОДЕРЖАЩИХ НАПИТКАХ МЕТОДОМ

ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (ВЭЖХ):

ФУРФУРОЛ,  5-ГИДРОКСИМЕТИЛФУРФУРОЛ,  5-МЕТИЛФУРФУРОЛ,

ВАНИЛИН, СИРИНГОВЫЙ АЛЬДЕГИД, КОНИФЕРИЛОВЫЙ АЛЬДЕГИД,

СИНАПАЛЬДЕГИД,  ГАЛЛОВАЯ КИСЛОТА,  ЭЛЛАГОВАЯ  КИСЛОТА,

ВАНИЛОВАЯ КИСЛОТА, СИРИНГОВАЯ КИСЛОТА И СКОПОЛЕТИН

1. Область применения

Метод относится к определению соединений: фурфурол, 5-гидроксиметилфурфурол, 5-метилфурфурол, ванилин, сиринговый альдегид, конифериловый альдегид, синаповый альдегид, галловая кислота, эллаговая кислота, ваниловая кислота, сиринговая кислота и скополетин, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Нормативная ссылка

Аналитический метод, признанный и опубликованный OIV под номером OIV-MA-BS-16: R2009.

3. Принцип

Определение методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детекцией с помощью спектрофотометрии на нескольких длинах волн и спектрофлуориметрии.

Определение с помощью ВЭЖХ с УФ-детекцией на нескольких длинах волн и спектрофлуориметрией

4. Реактивы

Реактивы должны быть аналитического качества. Используемая вода должна быть дистиллированной или иметь чистоту, по крайней мере, эквивалентную дистиллированной. Предпочтительно использовать микрофильтрованную воду с удельной проводимостью 18,2 МОм^.см.

4.1. спирт 96 % об.;

4.2. метанол качества ВЭЖХ (раствор B);

4.3. уксусная кислота, разбавленная до 0,5 % об. (раствор A);

4.4. подвижные фазы: (приведено только в качестве примера).

Раствор A (0,5 % уксусная кислота) и раствор B (чистый метанол). Фильтруется через мембрану (пористость 0,45 мкм). При необходимости дегазируют в ультразвуковой ванне;

4.5. стандартный раствор с чистотой не менее 99 %: фурфурол, 5-гидроксиметилфурфурол, 5-метилфурфурол, ванилин, сиринговый альдегид, конифериловый альдегид, синапальдегид, галловая кислота, эллаговая кислота, ваниловая кислота, сиринговая кислота и скополетин;

4.6. эталонный раствор: стандартные вещества растворяют в 50 % водно-спиртовом растворе.

Конечные концентрации в контрольном растворе должны быть следующими: фурфурол: 5 мг/л; 5-гидроксиметилфурфурол: 10 мг/л; 5-метилфурфурол: 2 мг/л; ванилин: 5 мг/л; сиринговый альдегид: 10 мг/л; конифериловый альдегид: 5 мг/л; синапальдегид: 5 мг/л; галловая кислота: 10 мг/л; эллаговая кислота: 10 мг/л; ваниловая кислота: 5 мг/л; сиринговая кислота: 5 мг/л; скополетин: 0,5 мг/л.

5. Оборудование

Стандартное лабораторное оборудование

5.1. Высокоэффективный жидкостный хроматограф, способный работать в бинарном градиентном режиме и оснащенный:

5.1.1. спектрофотометрическим детектором, способным измерять длины волн от 260 нм до 340 нм. Однако предпочтительно работать с детектором с несколькими длинами волн с диодной решеткой для подтверждения чистоты пиков;

5.1.2. спектрофлуориметрический детектор – длина волны возбуждения: 354 нм, длина волны излучения: 446 нм (для определения следов скополетина, который также обнаруживается при 313 нм с помощью спектрофотометрии);

5.1.3. устройство для введения 10 мкл или 20 мкл (например) исследуемой пробы;

5.1.4. колонка для высокоэффективной жидкостной хроматографии типа RP C18 с максимальным размером частиц 5 мкл;

5.2. шприцы для ВЭЖХ;

5.3. устройство для мембранной фильтрации малых объемов;

5.4. компьютеризированный интегратор или регистратор, совместимый со всем оборудованием и, в том числе имеющий несколько каналов сбора данных.

6. Порядок работы

6.1. Подготовка раствора для введения

Контрольный раствор и спиртосодержащий напиток фильтруют, при необходимости, через мембрану с максимальным диаметром пор 0,45 мкм.

6.2. Условия работы хроматографа: анализ проводят при температуре окружающей среды с помощью оборудования, описанного в подпункте 5.1, с использованием подвижных фаз, указанных в подпункте 4.4, со скоростью потока около 0,6 мл в минуту и следуя градиенту, приведенному ниже (приведено в качестве примера)

Время: 0 мин, 50 мин, 70 мин, 90 мин;

раствор A (вода-кислота): 100 %, 60 %, 100 %, 100 %;

раствор B (метанол): 0 %, 40 %, 0 %, 0 %.

Следует отметить, что в некоторых случаях этот градиент следует изменить, чтобы избежать коэлюции.

6.3. Определение

6.3.1. Вводят стандартные растворы отдельно, затем в смеси.

Адаптируют условия работы так, чтобы коэффициенты разрешения пиков всех соединений были равны по меньшей мере 1;

6.3.2. Вводят пробу, подготовленную в соответствии с подпунктом 6.1.

6.3.3. Измеряют площадь пиков в эталонном растворе и спиртосодержащем напитке, а также рассчитывают концентрации.

7. Выражение результатов

Концентрация каждого компонента выражается в мг/л.

8. Характеристики эффективности метода (точность)

Следующие данные получены в ходе международного исследования характеристик метода, проведенного в 2009 году в соответствии
с официальными процедурами, принятыми на международном уровне. [1], [2].

8.1. Фурфурол

8.2. 5-Гидроксиметилфурфурол

 8.3. 5-Метилфурфурол

8.4. Ванилин

8.5. Сиринговый альдегид

8.6. Конифериловый альдегид

8.7. Синапальдегид

8.8. Галловая кислота

8.9. Эллаговая кислота

8.10. Ваниловая кислота

8.11. Сиринговая кислота

8.12. Скополетин

Глава X

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ РАДИОУГЛЕРОДА В ЭТАНОЛЕ

1. Введение

Определение содержания радиоуглерода в этаноле позволяет отличить спирт на основе ископаемого топлива (синтетический спирт) от спирта на основе недавно произведенного сырья (ферментированный спирт).

2. Определение

Содержание радиоуглерода в этаноле следует рассчитывать методом, описанным в настоящем документе или описанным в стандарте SM EN 16640, метод C.

Естественное содержание радиоуглерода в атмосфере (эталонное значение), которое поглощается живой растительностью путем ассимиляции, не является постоянной величиной. Следовательно, эталонное значение определяется на этаноле из сырья, полученного в последний вегетационный период. Это годовое эталонное значение определяется в соответствии со стандартом SM EN 16640. Однако может быть принято другое эталонное значение, если оно сертифицировано аккредитованным органом.

3. Принцип

Содержание радиоуглерода в пробах, содержащих спирт с содержанием этанола не менее 85 % по массе, определяется непосредственно методом жидкостной сцинтилляционной счетной радиометрией.

4. Реактивы

4.1. Сцинтиллятор с толуолом

5,0 г 2,5-дифенилоксиазола (PPO);

0,5 г p-бис-[4-метил-5-фенилоксиазол (2)]-бензола (диметил-POPOP) в одном литре чистого толуола для анализа.

Можно также использовать готовые к использованию сцинтилляторы с толуолом данного состава, имеющиеся в продаже.

4.2. Стандартный радиоуглерод

Радиоуглерод n-гексадекан с активностью примерно 1 × 106 dpm/g (около 1,67 × 106 cBq/g) и с гарантированной точностью определения активности ± 2 % от относительной активности.

4.3. Этанол без радиоуглерода

Синтетический спирт из сырья ископаемого происхождения, содержащий не менее 85 % массы этанола, для определения фонового шума.

4.4. Спирт на основе первичного сырья, произведенного в последний вегетационный период, содержащий не менее 85 % массы этанола в виде эталонного раствора.

5. Аппаратура

5.1. многоканальный жидкостный сцинтилляционный спектрометр с процессором и автоматической внешней стандартизацией и отображением соотношения канал/внешний стандарт (стандартная конструкция: три измерительных канала и два канала для внешнего стандарта);

5.2. мерные флаконы, с низким содержанием калия, приспособленные для спектрометра, с резьбовыми пробками темного цвета с внутренней защитой из полиэтилена;

5.3. пипетки объемом 10 мл;

5.4. устройство для автоматического дозирования 10 мл;

5.5. круглодонная колба объемом 250 мл с пробкой из шлифованного стекла;

5.6. аппарат для дистилляции спирта с нагревательной рубашкой, например, типа Micko;

5.7. микролитровый шприц объемом 50 мл;

5.8. воронка пикнометра, пикнометры объемом 25 мл и 50 мл. В качестве альтернативы допускается использование эквивалентного оборудования, например электронного денситометра;

5.9. термостат с постоянной температурой ± 0,01 °C.

6. Процедура

6.1. Настройка оборудования

Оборудование должно быть настроено в соответствии с инструкциями производителя. Условия измерения являются оптимальными, если значение E2/B, показатели качества, находится на максимальном уровне.

E = efficiency (эффективность);

B = background (фоновый шум).

Оптимизируются только два канала измерения. Третий канал оставляется полностью открытым для контроля.

6.2. Выбор мерных флаконов

Заполняют больше мерных флаконов, чем потребуется в дальнейшем, по 10 мл синтетического этанола, не содержащего радиоуглерода, и 10 мл сцинтиллятора с толуолом. Каждый из них измеряется в течение не менее 4 циклов × 100 минут. Флаконы, фоновый шум которых отклоняется более чем на ± 1 % от среднего значения, удаляются. Используются только новые флаконы из одной партии.

6.3. Определение соотношения канал/внешний стандарт (RCSE)

Во время процесса настройки каналов (подпункт 6.1) RCSE определяется с помощью соответствующей программы расчета, в случае если определяется коэффициент эффективности. В качестве внешнего стандарта используется цезий 137, уже включенный при изготовлении.

6.4. Подготовка пробы

Можно измерять пробы с содержанием этанола не менее 85 % массы, без примесей, с поглощением ниже 450 нм. Незначительный остаток эфиров и альдегидов не оказывает деструктивного воздействия. Содержание спирта в пробе предварительно определяется с точностью до 0,1 %.

7. Измерение проб с использованием внешнего стандарта

7.1. Пробы с пониженной поглощающей способностью, описанные в подпункте 6.4, со значением RCSE примерно 1,8, могут быть измерены с помощью RCSE, что представляет собой меру коэффициента эффективности.

7.2. Измерение

С помощью пипетки в мерный флакон, проверенный на фоновый шум, вводят по 10 мл каждой пробы, подготовленного в соответствии с подпунктом 6.4, и добавляют 10 мл сцинтиллятора с толуолом с помощью устройства автоматического дозирования. Пробу во флаконах гомогенизируют соответствующими круговыми движениями. Жидкость не должна смачивать внутреннюю полиэтиленовую защиту в резьбовой пробке. Таким же образом готовят флакон с ископаемым этанолом, не содержащим радиоуглерода, для определения фонового шума. Для проверки соответствующего годового значения радиоуглерода готовят дубликат пробы из свежего этанола, полученного в последний вегетационный период, смешивая флакон с внутренним стандартом, см. пункт 8.

Контрольную пробу и пробу для фонового шума помещаются в начале серии измерений, которая должна содержать не более 10 анализируемых проб. Общее время измерения на пробу составляет не менее 2 × 100 минут, при этом отдельные пробы измеряются частями по 100 минут, чтобы можно было обнаружить возможные отклонения или неисправности оборудования. Таким образом, один цикл соответствует интервалу измерения 100 минут на пробу.

Контрольные пробы и пробы для фонового шума должны повторно готовиться каждые четыре недели.

В случае проб с немного пониженной абсорбцией (с RCSE примерно 1,8) эффективность изменяется незначительно. Если изменение находится в пределах ± 5 % отн., вероятно будет достигнута та же эффективность. В случае проб с более высокой абсорбцией, таких как денатурированные спирты, эффективность можно определить с помощью графика коррекции абсорбции. Если программа расчета отсутствует, следует использовать внутренний стандарт, что приведет к однозначному результату.

8. Измерение проб с использованием внутреннего стандарта гексадекан ¹⁴C

8.1. Процедура

Контрольные пробы и пробы для фонового шума (недавно произведенный этанол и фоссильный этанол), а также неизвестный материал измеряются в двух экземплярах. Дубликат пробы готовят в неселективном флаконе, добавляя точно отмеренное количество (30 μl) гексадекана радиоуглерода в качестве внутреннего стандарта (дополнительная активность примерно 26 269 dpm/gC, около 43 782 dpm/gC). Подготовка остальных проб и время измерения см. в подпункте 7.2, однако время измерения проб с внутренним стандартом может быть сокращено примерно до пяти минут путем предварительной настройки на 10⁵ импульсов. При серии измерений используется по одному дубликату контрольной пробы и пробы для фонового шума; они помещаются в начале серии измерений.

8.2. Использование внутреннего стандарта и мерных флаконов

Для предотвращения загрязнения при измерениях с внутренним стандартом, стандарт должен храниться и обрабатываться вдали от помещения, где подготавливаются и измеряются пробы для анализа. После измерения флаконы, проверенные на фоновый шум, могут быть использованы повторно. Резьбовые пробки и трубки, содержащие внутренний стандарт, удаляются.

9. Выражение результатов

9.1. Единицей измерения активности радиоактивного вещества является беккерель

1 Bq = 1 распад/сек

Указание удельной радиоактивности выражается в беккерелях
на грамм углерода = Bq/gC.

Для получения более практических результатов они должны быть выражены в сантибеккерелях (cBq/gC).

Можно также использовать описания и формулы, используемые
в специализированной литературе, основанные на dpm. Для получения соответствующих значений cBq значение dpm умножается на 100/60.

9.2. Выражение результатов с помощью внешнего стандарта

9.3. Выражение результатов с помощью внутреннего стандарта

9.4. Сокращения

cpm_pr – средний коэффициент подсчета проб за весь период измерения;

cpmNE – средняя частота импульсов фонового шума, рассчитанная таким же образом;

cpmIS – коэффициент подсчета проб с внутренним стандартом;

dpmIS – количество добавленного внутреннего стандарта (эталонная радиоактивность dpm);

V – объем используемых проб, в мл;

F – содержание в граммах чистого алкоголя на миллилитр,
в зависимости от концентрации;

Z – коэффициент эффективности, соответствующий значению RCSE;

1,918 – количество граммов алкоголя на грамм углерода.

10. Надежность метода

10.1. Повторяемость (r)

r = 0,632 cBq/g C;

S_(r) = ± 0,223 cBq/g C

10.2. Воспроизводимость (R)

R = 0,821 cBq/g C;

S_(R) = ± 0,290 cBq/g C.

Приложение

к Эталонным методам анализа спиртосодержащих напитков
и этилового спирта сельскохозяйственного происхождения